HJ 1364-2024 水质 阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的测定 高效液相色谱法 , 该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
中华人民共和国国家生态环境标准
HJ 1364—2024
水质 阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的
测定 高效液相色谱法
Water quality—Determination of avermectin B1a and avermectin B1b—
High performance liquid chromatography
2024⁃11⁃02 发布2025⁃05⁃01 实施
生态环境部 发 布
HJ 1364—2024
目 次
前言··························································································································Ⅱ
1 适用范围·················································································································1
2 规范性引用文件········································································································1
3 方法原理·················································································································1
4 干扰和消除··············································································································1
5 试剂和材料··············································································································1
6 仪器和设备··············································································································2
7 样品·······················································································································3
8 分析步骤·················································································································3
9 结果计算与表示········································································································4
10 准确度··················································································································5
11 质量保证和质量控制································································································5
12 废物处置···············································································································6
附录A（ 资料性） 方法的准确度······················································································7
Ⅰ
HJ 1364—2024
前 言
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国水污染防治法》《中华人民共和国海洋环境
保护法》，防治生态环境污染，改善生态环境质量，规范水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的测定方法，制
定本标准。
本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水、工业废水和海水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的高
效液相色谱法。
本标准的附录A 为资料性附录。
本标准为首次发布。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
本标准主要起草单位：江苏省南京环境监测中心。
本标准验证单位：河北省生态环境监测中心、江苏省镇江环境监测中心、江苏省扬州环境监测中
心、江苏省泰州环境监测中心、江苏省苏力环境科技有限责任公司和江苏新锐环境监测有限公司。
本标准生态环境部2024 年11 月2 日批准。
本标准自2025 年5 月1 日起实施。
本标准由生态环境部解释。
Ⅱ
HJ 1364—2024
水质 阿维菌素B1a和阿维菌素B1b的
测定 高效液相色谱法
警告：实验中使用的标准物质和有机溶剂均具有一定的毒性，试剂配制和样品前处理过程应在通
风橱内操作，按要求佩戴防护器具，避免直接接触皮肤和衣物。
1 适用范围
本标准规定了测定水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的高效液相色谱法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水、工业废水和海水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的测定。
取样体积100 mL，进样体积20 μL 时，阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的方法检出限均为0.03 μg/L，
测定下限均为0.12 μg/L。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标
准。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB 17378.3 海洋监测规范 第3 部分：样品采集、贮存与运输
HJ 91.1 污水监测技术规范
HJ 91.2 地表水环境质量监测技术规范
HJ 164 地下水环境监测技术规范
HJ 442.3 近岸海域环境监测技术规范 第三部分 近岸海域水质监测
3 方法原理
样品中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 用二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶剂萃取，萃取液经净化后浓缩至
干，在N⁃甲基咪唑存在下与三氟乙酸酐衍生化反应生成荧光物质，用高效液相色谱分离，荧光检测器
检测。根据保留时间定性，外标法定量。
4 干扰和消除
多环芳烃类化合物对测定有干扰，可通过净化柱消除。
5 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含目标化合物的纯水。
5.1 乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。
5.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
5.3 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。
5.4 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
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5.5 盐酸（HCl）：ρ=1.18 g/mL，w∈[36.0%，38.0%]。
5.6 N⁃甲基咪唑（C4H6N2），纯度≥99%。
5.7 三氟乙酸酐（C4F6O3），纯度≥99%。
5.8 氢氧化钠（NaOH）。
5.9 氯化钠（NaCl）。
在400 ℃下烘烤4 h，冷却至室温，于磨口玻璃瓶中密封保存。
5.10 无水硫酸钠（Na2SO4）。
在400 ℃下烘烤4 h，冷却至室温，于磨口玻璃瓶中密封保存。
5.11 盐酸溶液。
用盐酸（5.5）和水按1∶1 的体积比混合。
5.12 氢氧化钠溶液：ρ（NaOH）＝0.4 g/mL。
称取40 g 氢氧化钠（5.8）溶于100 mL 水中。
5.13 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂。
用二氯甲烷（5.3）和乙酸乙酯（5.1）按3∶1 的体积比混合。
5.14 衍生化试剂Ⅰ。
用N⁃甲基咪唑（5.6）和乙腈（5.4）按1∶1 的体积比混合，临用现配。
5.15 衍生化试剂Ⅱ。
用三氟乙酸酐（5.7）和乙腈（5.4）按1∶2 的体积比混合，临用现配。
5.16 阿维菌素B1a（C48H72O14）：纯度≥90%。
-18 ℃以下冷冻、密封、避光保存。
5.17 阿维菌素B1b（C47H70O14）：纯度≥90%。
-18 ℃以下冷冻、密封、避光保存。
5.18 标准贮备液：ρ=100 mg/L。
准确称取1.0 mg 阿维菌素B1a（5.16）、1.0 mg 阿维菌素B1b（5.17），用乙腈（5.4）溶解后转移至10 mL
容量瓶，乙腈（5.4）定容至标线。-18 ℃以下冷冻，密封、避光保存，保存期1 年。亦可购买市售阿维菌
素B1a 有证标准物质或阿维菌素B1b 有证标准物质，按照产品说明书保存。
5.19 标准使用液：ρ=10.0 mg/L。
准确移取500 μL 标准贮备液（5.18）至5 mL 容量瓶中，用乙腈（5.4）稀释定容至标线，-18 ℃以下
冷冻、密封、避光保存，保存期1 年。
5.20 净化柱：500 mg/6 mL，填料为石墨化碳黑，或其他等效净化柱。
5.21 滤膜：孔径0.45 μm，聚四氟乙烯或其他等效材质。
6 仪器和设备
6.1 采样瓶：500 mL，具塞磨口棕色玻璃瓶。
6.2 高效液相色谱仪：具荧光检测器。
6.3 色谱柱：填料粒径为5 μm，柱长15 cm，内径4.6 mm 的C18 反相色谱柱，或其他等效色谱柱。
6.4 浓缩装置：氮吹浓缩仪或其他性能相当的浓缩装置。
6.5 涡旋振荡混匀器。
6.6 分液漏斗：250 mL，玻璃材质。
6.7 离心管：5 mL，尖底具塞玻璃离心管。
6.8 一般实验室常用仪器和设备。
2
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7 样品
7.1 样品采集和保存
按照GB 17378.3、HJ 91.1、HJ 91.2、HJ 164 和HJ 442.3 的相关规定采集和运输样品。使用采样瓶
（6.1）采集样品，用盐酸溶液（5.11）或氢氧化钠溶液（5.12）调节pH 值至5~9，于4 ℃以下冷藏、避光保
存，4 天内完成萃取。若衍生化反应后不能及时分析，于-18 ℃以下冷冻、密封、避光保存，3 天内完成
分析。
每批次样品应至少采集1 个全程序空白样品，将1 份实验用水放入采样瓶（6.1）中，带到采样现
场，与盛装样品的采样瓶同时开盖和密封，随样品一起保存运回实验室。
7.2 试样的制备
7.2.1 萃取
摇匀样品后量取100 mL 于250 mL 分液漏斗（6.6）中，加入6 g 氯化钠（5.9），待氯化钠溶解后，加
入20 mL 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂（5.13），振摇、放气、静置分层。有机相萃取液经无水硫酸钠
（5.10）脱水后收集于浓缩管中，用浓缩装置（6.4）将萃取液浓缩至约2 mL，待净化。
注： 海水可不加氯化钠。
7.2.2 净化
分别用6 mL 甲醇（5.2）、6 mL 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂（5.13）活化净化柱（5.20），弃去有机
相，在活化过程中应确保净化柱填料不暴露于空气中，将浓缩后的萃取液（7.2.1）转移至净化柱上，自然
流出，收集流出液，用5 mL 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂（5.13）洗脱净化柱，合并所有洗脱液待浓缩。
7.2.3 浓缩
将洗脱液（7.2.2）用浓缩装置（6.4）浓缩至1 mL 左右，转移至离心管（6.7）中，再用2 mL 二氯甲烷⁃
乙酸乙酯混合溶剂（5.13）荡洗浓缩管，合并全部有机相至离心管中，60 ℃以下浓缩至干，待衍生化。
注： 如浓缩管具塞，无需将萃取液或洗脱液转移至离心管，可直接浓缩至干后，待衍生化。
7.2.4 衍生化
向离心管（7.2.3）中加入100 μL 衍生化试剂Ⅰ（5.14），加盖于涡旋振荡混匀器（6.5）上涡旋约30 s，
再加入150 μL 衍生化试剂Ⅱ（5.15），加盖涡旋约10 s，静置20 min 以上，加入750 μL 甲醇（5.2），加盖
涡旋约10 s，静置30 min 以上，用滤膜（5.21）过滤，待测。
7.3 空白试样的制备
用水代替样品，按照与试样制备（7.2）相同的步骤制备实验室空白试样。
8 分析步骤
8.1 仪器参考条件
流动相：甲醇（5.2）和水按体积比9∶1 混合；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min；荧光检测器：激发波长
365 nm，发射波长475 nm；进样体积：20 μL。
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8.2 工作曲线的建立
移取一定体积的标准使用液（5.19），包含至少5 个非零浓度点，于离心管（6.7）中60 ℃以下浓缩至
干，按照7.2.4 步骤衍生化，配制成阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的质量浓度均分别为20.0 μg/L、
100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L 和1000 μg/L 的标准系列（此为参考浓度）。按照仪器参考条件（8.1），
由低浓度到高浓度依次进样，以目标化合物浓度为横坐标，以峰面积（或峰高）为纵坐标，建立工作
曲线。
8.3 试样的测定
将制备好的试样（7.2），按照与建立工作曲线相同的条件（8.2）测定。若试样浓度超出工作曲线浓
度范围，应适当减少取样体积，重新制备试样。
8.4 空白试样的测定
按照与试样的测定（8.3）相同的步骤，测定空白试样（7.3）。
9 结果计算与表示
9.1 定性分析
根据样品中目标化合物与校准系列中目标化合物的保留时间定性。样品分析前，建立保留时间窗
t±3S。t 为校准时各浓度级别的目标化合物保留时间均值，S 为校准时各浓度级别目标化合物保留时
间的标准偏差，样品分析时，目标化合物应在保留时间窗内出峰。仪器参考条件（8.1）下，目标化合物
的标准溶液衍生物色谱图见图1。
标引序号说明：
1——阿维菌素B1b衍生物；
2——阿维菌素B1a衍生物。
图1 阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 标准溶液衍生物色谱图（ρ=100 μg/L）
9.2 定量分析
9.2.1 结果计算
根据目标化合物的峰面积（或峰高），采用外标法定量。
样品中目标化合物的质量浓度，按照公式（1）计算。
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ρi =
ρ1,i × V1
V × D …………………………（ 1 ）
式中：
ρi ——样品中目标化合物i 的质量浓度，μg/L；
ρ1,i ——由工作曲线计算所得的目标化合物i 质量浓度，μg/L；
V1 ——试样体积，mL；
V ——取样体积，mL；
D ——试样的稀释倍数。
9.2.2 结果表示
测定结果小数点后位数与方法检出限一致，最多保留3 位有效数字。
10 准确度
10.1 精密度
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度均为0.20 μg/L 的地表水、加标浓度均为
0.20 μg/L 的地下水、加标浓度均为1.00 μg/L 的生活污水非统一样品重复测定6 次：实验室内相对标
准偏差范围分别为3.9%~12%、3.6%~14% 和3.6%~15%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 测定浓度范围为0.02 μg/L~2.03 μg/L 的工业废水非
统一样品加标，低浓度加标浓度均为2.00 μg/L，高浓度加标浓度均为6.00 μg/L，重复测定6 次：实验
室内相对标准偏差范围分别为2.2%~11% 和4.0%~17%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度均为1.00 μg/L 的海水统一样品重复测定
6 次：实验室内相对标准偏差为2.0%~15%；实验室间相对标准偏差为4.1%~4.3%；重复性限为
0.21 μg/L~0.22 μg/L，再现性限为0.28 μg/L~0.29 μg/L。
精密度汇总数据参见附录A 中表A.1。
10.2 正确度
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度均为0.20 μg/L 的地表水、加标浓度均为
0.20 μg/L 的地下水、加标浓度均为1.00 μg/L 的生活污水非统一样品重复测定6 次：加标回收率范围
分别为72.5%~105%、78.5%~97.0% 和69.6%~117%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 测定浓度范围为0.02 μg/L~2.03 μg/L 的工业废水非
统一样品加标， 低浓度加标浓度均为2.00 μg/L，高浓度加标浓度均为6.00 μg/L，重复测定6 次：加标
回收率范围分别为74.5%~99.6% 和71.0%~104%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度为1.00 μg/L 的海水统一样品重复测定6 次：
加标回收率为79.6%~102%；加标回收率最终值为88.6%±15.0%~90.2%±13.6%。
正确度汇总数据参见附录A 中表A.2。
11 质量保证和质量控制
11.1 空白试验
全程序空白样品测定结果应低于方法检出限。每批次样品应至少测定1 个实验室空白，测定结果
应低于方法检出限。
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11.2 校准
工作曲线相关系数应≥0.995。
11.3 连续校准
每24 h 分析1 次工作曲线中间浓度点，测定结果与工作曲线该点理论浓度的相对误差应在
±20% 以内，否则应重新建立工作曲线。
11.4 平行样
每20 个样品或每批次样品（少于20 个）应至少测定1 个平行样。平行样测定结果的相对偏差应
在±30% 以内。
11.5 基体加标
每20 个样品或每批次样品（少于20 个）应测定1 个基体加标样，基体加标回收率应在60%~130%
之间。
12 废物处置
实验中产生的废物应集中收集，分类保存，并做好相应的标识，依法处置。
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附 录 A
（资料性）
方法的准确度
本方法的精密度和正确度汇总数据见表A.1 和表A.2。
表A.1 精密度汇总表
目标化合物
名称
阿维菌素B1a
阿维菌素B1b
样品类型
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
加标浓度
（μg/L）
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
实验室内
相对标准偏差
（%）
4.2~12
4.2~14
2.0~13
4.0~15
2.6~8.6
4.0~9.7
3.9~6.5
3.6~9.9
2.2~15
3.6~12
2.2~11
5.5~17
实验室间
相对标准偏差
（%）
—
—
4.1
—
—
—
—
—
4.3
—
—
—
重复性限
（μg/L）
—
—
0.21
—
—
—
—
—
0.22
—
—
—
再现性限
（μg/L）
—
—
0.29
—
—
—
—
—
0.28
—
—
—
表A.2 正确度汇总表
目标化合物名
称
阿维菌素B1a
阿维菌素B1b
样品类型
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
加标浓度
（μg/L）
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
加标回收率范围（%）
73.5~105
78.5~97.0
79.6~101
75.2~117
81.9~99.6
71.0~94.8
72.5~105
83.5~93.7
84.9~102
69.6~115
74.5~96.9
86.5~104
S-P（%）
—
—
7.5
—
—
—
—
—
6.8
—
—
—
-P
±2S-P（%）
—
—
88.6±15.0
—
—
—
—
—
90.2±13.6
—
—
—
———————————
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水质 阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的
测定 高效液相色谱法
Water quality—Determination of avermectin B1a and avermectin B1b—
High performance liquid chromatography
2024⁃11⁃02 发布2025⁃05⁃01 实施
生态环境部 发 布
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目 次
前言··························································································································Ⅱ
1 适用范围·················································································································1
2 规范性引用文件········································································································1
3 方法原理·················································································································1
4 干扰和消除··············································································································1
5 试剂和材料··············································································································1
6 仪器和设备··············································································································2
7 样品·······················································································································3
8 分析步骤·················································································································3
9 结果计算与表示········································································································4
10 准确度··················································································································5
11 质量保证和质量控制································································································5
12 废物处置···············································································································6
附录A（ 资料性） 方法的准确度······················································································7
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前 言
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》《中华人民共和国水污染防治法》《中华人民共和国海洋环境
保护法》，防治生态环境污染，改善生态环境质量，规范水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的测定方法，制
定本标准。
本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水、工业废水和海水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的高
效液相色谱法。
本标准的附录A 为资料性附录。
本标准为首次发布。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
本标准主要起草单位：江苏省南京环境监测中心。
本标准验证单位：河北省生态环境监测中心、江苏省镇江环境监测中心、江苏省扬州环境监测中
心、江苏省泰州环境监测中心、江苏省苏力环境科技有限责任公司和江苏新锐环境监测有限公司。
本标准生态环境部2024 年11 月2 日批准。
本标准自2025 年5 月1 日起实施。
本标准由生态环境部解释。
Ⅱ
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水质 阿维菌素B1a和阿维菌素B1b的
测定 高效液相色谱法
警告：实验中使用的标准物质和有机溶剂均具有一定的毒性，试剂配制和样品前处理过程应在通
风橱内操作，按要求佩戴防护器具，避免直接接触皮肤和衣物。
1 适用范围
本标准规定了测定水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的高效液相色谱法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水、工业废水和海水中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的测定。
取样体积100 mL，进样体积20 μL 时，阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的方法检出限均为0.03 μg/L，
测定下限均为0.12 μg/L。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标
准。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB 17378.3 海洋监测规范 第3 部分：样品采集、贮存与运输
HJ 91.1 污水监测技术规范
HJ 91.2 地表水环境质量监测技术规范
HJ 164 地下水环境监测技术规范
HJ 442.3 近岸海域环境监测技术规范 第三部分 近岸海域水质监测
3 方法原理
样品中阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 用二氯甲烷和乙酸乙酯混合溶剂萃取，萃取液经净化后浓缩至
干，在N⁃甲基咪唑存在下与三氟乙酸酐衍生化反应生成荧光物质，用高效液相色谱分离，荧光检测器
检测。根据保留时间定性，外标法定量。
4 干扰和消除
多环芳烃类化合物对测定有干扰，可通过净化柱消除。
5 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含目标化合物的纯水。
5.1 乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。
5.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。
5.3 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。
5.4 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
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5.5 盐酸（HCl）：ρ=1.18 g/mL，w∈[36.0%，38.0%]。
5.6 N⁃甲基咪唑（C4H6N2），纯度≥99%。
5.7 三氟乙酸酐（C4F6O3），纯度≥99%。
5.8 氢氧化钠（NaOH）。
5.9 氯化钠（NaCl）。
在400 ℃下烘烤4 h，冷却至室温，于磨口玻璃瓶中密封保存。
5.10 无水硫酸钠（Na2SO4）。
在400 ℃下烘烤4 h，冷却至室温，于磨口玻璃瓶中密封保存。
5.11 盐酸溶液。
用盐酸（5.5）和水按1∶1 的体积比混合。
5.12 氢氧化钠溶液：ρ（NaOH）＝0.4 g/mL。
称取40 g 氢氧化钠（5.8）溶于100 mL 水中。
5.13 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂。
用二氯甲烷（5.3）和乙酸乙酯（5.1）按3∶1 的体积比混合。
5.14 衍生化试剂Ⅰ。
用N⁃甲基咪唑（5.6）和乙腈（5.4）按1∶1 的体积比混合，临用现配。
5.15 衍生化试剂Ⅱ。
用三氟乙酸酐（5.7）和乙腈（5.4）按1∶2 的体积比混合，临用现配。
5.16 阿维菌素B1a（C48H72O14）：纯度≥90%。
-18 ℃以下冷冻、密封、避光保存。
5.17 阿维菌素B1b（C47H70O14）：纯度≥90%。
-18 ℃以下冷冻、密封、避光保存。
5.18 标准贮备液：ρ=100 mg/L。
准确称取1.0 mg 阿维菌素B1a（5.16）、1.0 mg 阿维菌素B1b（5.17），用乙腈（5.4）溶解后转移至10 mL
容量瓶，乙腈（5.4）定容至标线。-18 ℃以下冷冻，密封、避光保存，保存期1 年。亦可购买市售阿维菌
素B1a 有证标准物质或阿维菌素B1b 有证标准物质，按照产品说明书保存。
5.19 标准使用液：ρ=10.0 mg/L。
准确移取500 μL 标准贮备液（5.18）至5 mL 容量瓶中，用乙腈（5.4）稀释定容至标线，-18 ℃以下
冷冻、密封、避光保存，保存期1 年。
5.20 净化柱：500 mg/6 mL，填料为石墨化碳黑，或其他等效净化柱。
5.21 滤膜：孔径0.45 μm，聚四氟乙烯或其他等效材质。
6 仪器和设备
6.1 采样瓶：500 mL，具塞磨口棕色玻璃瓶。
6.2 高效液相色谱仪：具荧光检测器。
6.3 色谱柱：填料粒径为5 μm，柱长15 cm，内径4.6 mm 的C18 反相色谱柱，或其他等效色谱柱。
6.4 浓缩装置：氮吹浓缩仪或其他性能相当的浓缩装置。
6.5 涡旋振荡混匀器。
6.6 分液漏斗：250 mL，玻璃材质。
6.7 离心管：5 mL，尖底具塞玻璃离心管。
6.8 一般实验室常用仪器和设备。
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7 样品
7.1 样品采集和保存
按照GB 17378.3、HJ 91.1、HJ 91.2、HJ 164 和HJ 442.3 的相关规定采集和运输样品。使用采样瓶
（6.1）采集样品，用盐酸溶液（5.11）或氢氧化钠溶液（5.12）调节pH 值至5~9，于4 ℃以下冷藏、避光保
存，4 天内完成萃取。若衍生化反应后不能及时分析，于-18 ℃以下冷冻、密封、避光保存，3 天内完成
分析。
每批次样品应至少采集1 个全程序空白样品，将1 份实验用水放入采样瓶（6.1）中，带到采样现
场，与盛装样品的采样瓶同时开盖和密封，随样品一起保存运回实验室。
7.2 试样的制备
7.2.1 萃取
摇匀样品后量取100 mL 于250 mL 分液漏斗（6.6）中，加入6 g 氯化钠（5.9），待氯化钠溶解后，加
入20 mL 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂（5.13），振摇、放气、静置分层。有机相萃取液经无水硫酸钠
（5.10）脱水后收集于浓缩管中，用浓缩装置（6.4）将萃取液浓缩至约2 mL，待净化。
注： 海水可不加氯化钠。
7.2.2 净化
分别用6 mL 甲醇（5.2）、6 mL 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂（5.13）活化净化柱（5.20），弃去有机
相，在活化过程中应确保净化柱填料不暴露于空气中，将浓缩后的萃取液（7.2.1）转移至净化柱上，自然
流出，收集流出液，用5 mL 二氯甲烷⁃乙酸乙酯混合溶剂（5.13）洗脱净化柱，合并所有洗脱液待浓缩。
7.2.3 浓缩
将洗脱液（7.2.2）用浓缩装置（6.4）浓缩至1 mL 左右，转移至离心管（6.7）中，再用2 mL 二氯甲烷⁃
乙酸乙酯混合溶剂（5.13）荡洗浓缩管，合并全部有机相至离心管中，60 ℃以下浓缩至干，待衍生化。
注： 如浓缩管具塞，无需将萃取液或洗脱液转移至离心管，可直接浓缩至干后，待衍生化。
7.2.4 衍生化
向离心管（7.2.3）中加入100 μL 衍生化试剂Ⅰ（5.14），加盖于涡旋振荡混匀器（6.5）上涡旋约30 s，
再加入150 μL 衍生化试剂Ⅱ（5.15），加盖涡旋约10 s，静置20 min 以上，加入750 μL 甲醇（5.2），加盖
涡旋约10 s，静置30 min 以上，用滤膜（5.21）过滤，待测。
7.3 空白试样的制备
用水代替样品，按照与试样制备（7.2）相同的步骤制备实验室空白试样。
8 分析步骤
8.1 仪器参考条件
流动相：甲醇（5.2）和水按体积比9∶1 混合；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min；荧光检测器：激发波长
365 nm，发射波长475 nm；进样体积：20 μL。
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8.2 工作曲线的建立
移取一定体积的标准使用液（5.19），包含至少5 个非零浓度点，于离心管（6.7）中60 ℃以下浓缩至
干，按照7.2.4 步骤衍生化，配制成阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 的质量浓度均分别为20.0 μg/L、
100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L 和1000 μg/L 的标准系列（此为参考浓度）。按照仪器参考条件（8.1），
由低浓度到高浓度依次进样，以目标化合物浓度为横坐标，以峰面积（或峰高）为纵坐标，建立工作
曲线。
8.3 试样的测定
将制备好的试样（7.2），按照与建立工作曲线相同的条件（8.2）测定。若试样浓度超出工作曲线浓
度范围，应适当减少取样体积，重新制备试样。
8.4 空白试样的测定
按照与试样的测定（8.3）相同的步骤，测定空白试样（7.3）。
9 结果计算与表示
9.1 定性分析
根据样品中目标化合物与校准系列中目标化合物的保留时间定性。样品分析前，建立保留时间窗
t±3S。t 为校准时各浓度级别的目标化合物保留时间均值，S 为校准时各浓度级别目标化合物保留时
间的标准偏差，样品分析时，目标化合物应在保留时间窗内出峰。仪器参考条件（8.1）下，目标化合物
的标准溶液衍生物色谱图见图1。
标引序号说明：
1——阿维菌素B1b衍生物；
2——阿维菌素B1a衍生物。
图1 阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 标准溶液衍生物色谱图（ρ=100 μg/L）
9.2 定量分析
9.2.1 结果计算
根据目标化合物的峰面积（或峰高），采用外标法定量。
样品中目标化合物的质量浓度，按照公式（1）计算。
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ρi =
ρ1,i × V1
V × D …………………………（ 1 ）
式中：
ρi ——样品中目标化合物i 的质量浓度，μg/L；
ρ1,i ——由工作曲线计算所得的目标化合物i 质量浓度，μg/L；
V1 ——试样体积，mL；
V ——取样体积，mL；
D ——试样的稀释倍数。
9.2.2 结果表示
测定结果小数点后位数与方法检出限一致，最多保留3 位有效数字。
10 准确度
10.1 精密度
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度均为0.20 μg/L 的地表水、加标浓度均为
0.20 μg/L 的地下水、加标浓度均为1.00 μg/L 的生活污水非统一样品重复测定6 次：实验室内相对标
准偏差范围分别为3.9%~12%、3.6%~14% 和3.6%~15%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 测定浓度范围为0.02 μg/L~2.03 μg/L 的工业废水非
统一样品加标，低浓度加标浓度均为2.00 μg/L，高浓度加标浓度均为6.00 μg/L，重复测定6 次：实验
室内相对标准偏差范围分别为2.2%~11% 和4.0%~17%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度均为1.00 μg/L 的海水统一样品重复测定
6 次：实验室内相对标准偏差为2.0%~15%；实验室间相对标准偏差为4.1%~4.3%；重复性限为
0.21 μg/L~0.22 μg/L，再现性限为0.28 μg/L~0.29 μg/L。
精密度汇总数据参见附录A 中表A.1。
10.2 正确度
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度均为0.20 μg/L 的地表水、加标浓度均为
0.20 μg/L 的地下水、加标浓度均为1.00 μg/L 的生活污水非统一样品重复测定6 次：加标回收率范围
分别为72.5%~105%、78.5%~97.0% 和69.6%~117%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 测定浓度范围为0.02 μg/L~2.03 μg/L 的工业废水非
统一样品加标， 低浓度加标浓度均为2.00 μg/L，高浓度加标浓度均为6.00 μg/L，重复测定6 次：加标
回收率范围分别为74.5%~99.6% 和71.0%~104%。
6 家实验室对阿维菌素B1a 和阿维菌素B1b 加标浓度为1.00 μg/L 的海水统一样品重复测定6 次：
加标回收率为79.6%~102%；加标回收率最终值为88.6%±15.0%~90.2%±13.6%。
正确度汇总数据参见附录A 中表A.2。
11 质量保证和质量控制
11.1 空白试验
全程序空白样品测定结果应低于方法检出限。每批次样品应至少测定1 个实验室空白，测定结果
应低于方法检出限。
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11.2 校准
工作曲线相关系数应≥0.995。
11.3 连续校准
每24 h 分析1 次工作曲线中间浓度点，测定结果与工作曲线该点理论浓度的相对误差应在
±20% 以内，否则应重新建立工作曲线。
11.4 平行样
每20 个样品或每批次样品（少于20 个）应至少测定1 个平行样。平行样测定结果的相对偏差应
在±30% 以内。
11.5 基体加标
每20 个样品或每批次样品（少于20 个）应测定1 个基体加标样，基体加标回收率应在60%~130%
之间。
12 废物处置
实验中产生的废物应集中收集，分类保存，并做好相应的标识，依法处置。
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附 录 A
（资料性）
方法的准确度
本方法的精密度和正确度汇总数据见表A.1 和表A.2。
表A.1 精密度汇总表
目标化合物
名称
阿维菌素B1a
阿维菌素B1b
样品类型
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
加标浓度
（μg/L）
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
实验室内
相对标准偏差
（%）
4.2~12
4.2~14
2.0~13
4.0~15
2.6~8.6
4.0~9.7
3.9~6.5
3.6~9.9
2.2~15
3.6~12
2.2~11
5.5~17
实验室间
相对标准偏差
（%）
—
—
4.1
—
—
—
—
—
4.3
—
—
—
重复性限
（μg/L）
—
—
0.21
—
—
—
—
—
0.22
—
—
—
再现性限
（μg/L）
—
—
0.29
—
—
—
—
—
0.28
—
—
—
表A.2 正确度汇总表
目标化合物名
称
阿维菌素B1a
阿维菌素B1b
样品类型
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
地表水
地下水
海水
生活污水
工业废水
工业废水
加标浓度
（μg/L）
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
0.20
0.20
1.00
1.00
2.00
6.00
加标回收率范围（%）
73.5~105
78.5~97.0
79.6~101
75.2~117
81.9~99.6
71.0~94.8
72.5~105
83.5~93.7
84.9~102
69.6~115
74.5~96.9
86.5~104
S-P（%）
—
—
7.5
—
—
—
—
—
6.8
—
—
—
-P
±2S-P（%）
—
—
88.6±15.0
—
—
—
—
—
90.2±13.6
—
—
—
———————————
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