T/BPCT 007-2024 禽蛋中磺胺类和喹诺酮类兽药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS 67.120.20
X 18
团体标准
T/BPCT 007-2024
禽蛋中磺胺类和喹诺酮类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of sulfonamides and quinolones veterinarydrugs in poultry egg — Liquid chromatography tandem massspectrometry method
2024-09-27 发布2024-09-30 实施
北京理化分析测试技术学会发布

前言
本标准按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1 部分：标准化标准的结构和起草规则》给出的规则
起草。
本标准由北京理化分析测试技术学会提出并归口。
本标准负责起草单位：北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）。
本标准主要起草人：冯月超，贾丽，刘艳，王建凤，丁奇，王颖，周欣燃。
1
禽蛋中磺胺类和喹诺酮类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1 范围
本标准规定了禽蛋中23 种磺胺类和18 种喹诺酮类兽药残留的液相色谱-串联质谱检测方法。
本标准适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋等生鲜禽蛋中喹诺酮类和磺胺类药物的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过本文的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中凡是注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文
件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。
3 术语和定义
本标准没有需要界定的术语和定义。
4 方法原理
禽蛋中的磺胺类和喹诺酮类化合物，用含1%乙酸的乙腈溶液提取，提取液通过滤过型固相萃取柱净化，
净化液吹至近干后复溶。采用液相色谱串联质谱法测定，基质添加外标法定量。
5 试剂和材料
以下所用的试剂除另有说明外，均为分析纯，水为符合GB/T 6682 规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
5.1.2 乙酸（CH3COOH）：色谱纯。
5.1.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。
5.2 溶液配制
5.2.1 提取液：取乙酸10 mL，用乙腈稀释至1000 mL，混匀即得1%乙酸乙腈溶液。
5.2.2 0.1%乙酸水溶液：取1 mL乙酸用水稀释至1000 mL，混匀。
5.2.3 复溶液：取上述0.1%乙酸水溶液（5.2.2）90 mL与10 mL乙腈，混匀即得0.1%乙酸水-乙腈溶液（9:1，
v:v）。
2
5.3 标准品
标准品：41种被测物（包括23种磺胺类和18种喹诺酮类）的中英文名称、缩写、CAS号等具体见附录
A中的表A.1，纯度均大于95%。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 标准标储备液：精密称取41种被测物标准品适量（相当于各被测物的有效成分10.0 mg），加入少量
乙腈和几滴甲酸使其溶解并用乙腈定容至50 mL，配制成浓度为200 μg/mL的标储备液。-18℃冷冻避光可保
存12个月。
5.4.2 混合标准储备液：将被测物按照种类分为两组，用乙腈分别配制成被测浓度均为5 μg/mL的23种磺
胺混合标准储备液和18种喹诺酮的混合标准储备液。-18℃冷冻避光可保存3个月。
5.4.3 混合标准中间液：取两组混合标准储备液（5.4.2）用乙腈稀释配置成1 μg/mL的标准混合中间液。
5.5 材料
5.5.1 针筒式滤膜（有机系，尼龙材质，0.22 μm）；
5.5.2 滤过型兽药残留净化柱(1)。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源；
6.2 离心机；
6.3 恒温水浴氮吹仪；
6.4 多管涡旋混匀仪；
6.5 分析天平：感量0. 01 mg和0.01 g。
7 试样制备
生鲜禽蛋4℃冷藏保存；取适量新鲜禽蛋去壳均质，均质后的试样-18℃冷冻保存。
8 测定步骤
8.1 样品前处理方法
（1）FaVEx-NM50 兽药残留净化柱是巨研科技股份有限公司提供的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，
并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。
3
样品称样1.0 g（精确至0.01g）于50 mL 螺纹盖离心管中，加入10 mL 提取液（5.2.1），振荡15 min，
6000 r/min 离心5 min。取5 mL 上清液过兽药残留净化柱（5.5.2），以不大于1 滴/秒的流速收集流出液，
于45℃以下水浴中氮气吹至近干，加入1 mL 复溶液（5.2.3），涡旋1 min，过0.22 μm 有机滤膜后待测。
8.2 空白试验
不称取试样，按8.1 的步骤做空白实验。
8.3 基质添加标准曲线的制备
称取不含被测物的基质空白禽蛋试样1.0 g，向其中加入混合标准中间液（5.4.3）0 μL、2 μL、5 μL、
10 μL、20 μL、50 μL，混匀后，按照8.1 的方法前处理，复溶过膜后得到系列基质加标标准工作液，相当
于标准工作液浓度分别为0 ng/mL、1 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL，即试样中的含
量分别为0 μg/kg、2 μg/kg、5 μg/kg、10 μg/kg、20 μg/kg、50 μg/kg。
8.4 测定
8.4.1 液相色谱参考条件
a）色谱柱：BEH C18（1.7 μm，2.1×100 mm）或相当者；
b）柱温：30℃；
c）进样量：5 μL；
e）流速：0.3 mL/min
f）梯度洗脱程序参考表1。
表1 液相色谱洗脱梯度表
时间（min） 乙腈（%） 0.1%乙酸水溶液（%）
0.0 5 95
1.0 5 95
2.0 10 90
7.0 15 85
11.0 90 10
13.0 100 0
13.1 5 95
15.0 5 95
8.4.2 质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源，正离子扫描（ES+）；
b）检测方式：多反应监测（MRM）；
c）毛细管电压：1.5 kV；
4
d）离子源温度：150℃；
e）脱溶剂温度：450℃；
f）脱溶剂气流量：800 L/hr；
g）锥孔气流量：150 L/hr；
h）碰撞气体为氩气；
i）其它质谱参数参考附录B中的表B.1。
8.4.3 定性测定
用液相色谱-串联质谱联用法对试样进行定性判定，在相同试验条件下，样液谱图中应呈现定量离子对
和定性离子对的色谱峰，被测物质的质量色谱峰保留时间与标准溶液中对应物质的色谱峰保留时间偏差在
±2.5%之内；试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差
不超过表2规定范围，则可以判断试样中存在对应的目标物质。
表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差
相对离子丰度（%） >50 20~50（含） 10~20（含） ≤10
允许的相对偏差（%） ±20 ±25 ±30 ±50
8.4.4 定量测定
取基质添加标准溶液和试样溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。基质添加标准溶液
及试样溶液中试样中被测物的峰面积应在仪器检测的线性范围之内，试样中被测物含量超出线性范围时应
用基质空白液进行适当倍数稀释后再进行分析。基质添加标准溶液中总离子流图和特征离子质量色谱图见
附录C中图C.1和图C.2。
9 结果计算和表述
结果按式（1）计算：
X = C×V1×V3×1000
V2×m×1000
........................................（1）
式中：
X —— 试样中被测组分含量，单位为：微克/千克（μg/kg）；
m —— 试样的称样量，单位为：克（g）；
C —— 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为：纳克/毫升（ng/mL）；
V1 —— 复溶液的体积，单位为：毫升（mL）；
V2 —— 移取提取液上清液的体积，单位为：毫升（mL）；
5
V3 —— 加入提取液的体积，单位为：毫升（mL）。
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留一位小数。
10 方法准确度、精密度和灵敏度
10.1 准确度
本方法41种被测物在2 μg/kg~50 μg/kg添加浓度水平上的回收率范围是60%~120%。
10.2 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤20%，批间相对标准偏差≤20%。
10.3 灵敏度
当称样量为1.0 g 时，本方法磺胺类和喹诺酮类检出限均为0.5 μg/kg，定量限均为2.0 μg/kg。
6
附录A
（资料性）
41 种被测物的中英文名称、缩写、CAS 号、分子式和相对分子质量
本方法41 种被测物的中英文名称、缩写、CAS 号见表A.1。
表A.1 41 种被测物的中英文名称、缩写、CAS 号、分子式和相对分子质量
序号中文名称英文名称缩写CAS 号分子式
相对
分子质量
1 磺胺索嘧啶Sulfisomidine SIM 515-64-0 C12H14N4O2S 278.3
2 磺胺脒Sulfaguanidine SGN 57-67-0 C7H10N4O2S 214.2
3 磺胺醋酰Sulfacetamide SAA 144-80-9 C8H10N2O3S 214.2
4 磺胺多辛Sulfadoxin SDX 2447-57-6 C12H14N4O4S 310.3
5 磺胺地索辛Sulfadimethoxine SDT 122-11-2 C12H14N4O4S 310.3
6 磺胺对甲氧嘧啶Sulfameter SMD 651-06-9 C11H12N4O3S 280.3
7 磺胺甲氧嗪Sulfamethoxypyridazine SMP 80-35-3 C11H12N4O3S 280.3
8 磺胺间甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine SMM 1220-83-3 C11H12N4O3S 280.3
9 磺胺二甲嘧啶Sulfadimidine SDM 57-68-1 C12H14N4O2S 278.3
10 磺胺鯻唑Sulfamoxol SMO 729-99-7 C11H13N3O3S 267.3
11 磺胺异鯻唑Sulfisoxazole SFZ 127-69-5 C11H13N3O3S 267.3
12 磺胺硝苯Sulfanitran SAN 122-16-7 C14H13N3O5S 335.3
13 磺胺苯吡唑Sulfaphenazole SPA 526-08-9 C15H14N4O2S 314.4
14 磺胺喹沙啉Sulfaquinoxaline SQX 59-40-5 C14H12N4O2S 300.3
15 甲氧苄啶Trimethoprim TMP 738-70-5 C14H18N4O3 290.3
16 磺胺氯达嗪Sulfachloropyridazine SCP 80-32-0 C10H9ClN4O2S 284.7
17 磺胺苯酰Sulfabenzamide SBA 127-71-9 C13H12N2O3S 276.3
18 磺胺甲二唑Sulfamethizole SMT 144-82-1 C9H10N4O2S2 270.3
19 磺胺甲嘧啶Sulfamerazine SMR 127-79-7 C11H12N4O2S 264.3
20 磺胺噻唑Sulfathiazole STZ 72-14-0 C9H9N3O2S2 255.3
21 磺胺甲鯻唑Sulfamethoxazole SMZ 723-46-6 C10H11N3O3S 253.3
22 磺胺嘧啶Sulfadiazine SDZ 68-35-9 C10H10N4O2S 250.3
7
表A.1 23 种磺胺类和18 种喹诺酮类的中英文名称、缩写、CAS 号、分子式和相对分子质量（续）
序号中文名称英文名称缩写CAS 号分子式
相对
分子质量
23 磺胺吡啶Sulfapyridine SPD 144-83-2 C11H11N3O2S 249.3
24 奥比杀星Orbifloxacin ORB 113617-63-3 C19H20F3N3O3 395.4
25 氟罗杀星Fleroxacin FLE 79660-72-3 C17H18F3N3O3 369.3
26
丹诺沙星
（达氟沙星）
Danofloxacin DAN 112398-08-0 C19H20FN3O3 357.4
27 环丙沙星Ciprofloxacin CIP 85721-33-1 C17H18FN3O3 331.3
28 依诺沙星Enoxacin ENX 74011-58-8 C15H17FN4O3 320.3
29 诺氟沙星Norfloxacin NOR 70458-96-7 C16H18FN3O3 319.3
30 氟甲喹Flumequin FLU 42835-25-6 C14H12FNO3 261.2
31 奥索利酸Oxolinic acid OXO 14698-29-4 C13H11NO5 261.2
32 萘啶酸Nalidixic acid NAL 389-08-2 C12H12N2O3 232.2
33 双氟沙星Difloxacin DFX 91296-86-5 C21H19F2N3O3 399.4
34 斯帕沙星Sparfloxacin SPX 110871-86-8 C19H22F2N4O3 392.4
35 沙拉沙星Sarafloxacin SFX 91296-87-6 C20H17F2N3O3 385.4
36 氧氟沙星Ofloxacin OFX 82419-36-1 C18H20FN3O4 361.4
37 恩诺沙星Enrofloxacin ENR 93106-60-6 C19H22FN3O3 359.4
38 洛美沙星Lomefloxacin LOM 98079-52-8 C17H19F2N3O3 351.4
39 培氟沙星Perfloxacin PEF 70458-92-3 C17H20FN3O3 333.4
40 吡哌酸Pipemidic acid PPA 51940-44-4 C14H17N5O3 303.3
41 西诺沙星Cinoxacin CIX 28657-80-9 C12H10N2O5 262.2
8
附录B
（资料性）
41 种被测物的质谱参数
41种被测物的质谱参数见表B.1
表B.1 41种被测物的质谱参数（带*的为定量离子）
序号缩写
保留时间
（min）
母离子
(m/z)
子离子
(m/z)
锥孔电压
（V）
碰撞能
（eV）
1 SIM 3.28 279.2 124.1*/186.1 10 20/16
2 SGN 1.03 215.1 156.0*/92.0 22 14/24
3 SAA 3.04 215.1 156.0*/92.0 10 8/20
4 SDX 8.69 311.2 156.1*/92.0 42 16/26
5 SDT 9.37 311.2 156.0*/92.0 50 20/32
6 SMD 6.22 281.2 156.1*/92.0 28 16/24
7 SMP 6.61 281.2 156.0*/108.0 46 16/26
8 SMM 8.12 281.2 156.0*/92.0 32 16/26
9 SDM 6.03 279.2 186.1*/92.0 18 16/30
10 SMO 5.78 268.2 156.0*/92.0 28 14/26
11 SFZ 9.02 268.2 156.0*/92.0 34 12/24
12 SAN 9.82 336.5 156.0*/134.1 30 10/24
13 SPA 9.42 315.2 158.2*/92.0 10 28/34
14 SQX 9.38 301.2 156.0*/108.0 36 16/24
15 TMP 5.21 291.3 230.2*/123.1 62 22/24
16 SCP 8.26 285.2 156.0*/92.0 32 14/28
17 SBA 9.22 277.2 156.1*/92.0 26 12/24
18 SMT 6.43 271.2 156.0*/108.0 22 14/22
19 SMR 4.69 265.2 156.1*/92.0 12 16/26
20 STZ 4.22 256.1 156.0*/92.0 22 14/22
21 SMZ 8.77 254.2 156.0*/92.0 16 14/26
22 SDZ 3.51 251.2 152.1*/92.0 14 14/26
9
表B.1 41种被测物的质谱参数（带*的为定量离子）（续）
序号缩写
保留时间
（min）
母离子
(m/z)
子离子
(m/z)
锥孔电压
（V）
碰撞能
（eV）
23 SPD 4.43 250.2 156.0*/92.0 32 16/26
24 ORB 7.75 396.6 295.2*/226.1 48 22/44
25 FLE 5.82 370.6 269.3*/194.1 52 26/44
26 DAN 7.13 358.1 96.1*/82.0 42 22/36
27 CIP 6.27 332.1 245.0*/231.0 40 22/38
28 ENX 5.39 321.1 234.0*/206.0 50 22/30
29 NOR 5.88 320.1 233.1*/205.0 36 24/32
30 FLU 9.81 262.0 202.0*/126.0 8 32/44
31 OXO 9.15 262.0 216.0*/160.0 42 26/36
32 NAL 9.72 233.0 187.0*/159.0 46 26/30
33 DFX 8.61 400.0 299.1*/279.1 34 28/36
34 SPX 8.62 393.1 292.1/251.1 12 24/32
35 SFX 8.55 386.1 299.1*/322.1 54 26/24
36 OFX 5.94 362.1 261.1*/318.2 18 26/26
37 ENR 7.58 360.1 245.1*/203.1 28 26/38
38 LOM 6.83 352.1 265.1*/237 42 24/32
39 PEF 6.15 334.1 205.0*/233.1 24 32/26
40 PPA 4.12 304.1 217.1*/189.0 42 22/32
41 CIX 8.84 263.0 217.0*/189.0 44 20/28
10
附录C
（资料性）
41 种被测物的MRM 选择离子流图
41 种被测物标准溶液的总离子流图见图C.1，特征离子质量色谱图图C.2。
图C.1 总离子流图（基质标10ng/mL）
11
图C.1 总离子流图（基质标10ng/mL）(续)
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1
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图C.2 41 种被测物的基质添加标准溶液的特征离子质量色谱图（10ng/mL）
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图C.2 41 种被测物的基质添加标准溶液的特征离子质量色谱图（10ng/mL）(续)
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