GB 5009.256-2025 食品安全国家标准 食品中多种磷酸盐的测定 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
中华人民共和国国家标准
GB5009.256—2025
食品安全国家标准
食品中多种磷酸盐的测定
2025-03-16发布2025-09-16实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国家市场监督管理总局发布
前 言
本标准代替GB5009.256—2016《食品安全国家标准 食品中多种磷酸盐的测定》。
本标准与GB5009.256—2016相比,主要变化如下:
———更改了方法的适用范围;
———删除了六偏磷酸盐的测定;
———更改了方法原理的表述;
———增加了“第二法 食品中磷酸根(PO43- )总量的测定”。
Ⅰ
GB5009.256—2025
食品安全国家标准
食品中多种磷酸盐的测定
1 范围
本标准规定了食品中以磷酸根(PO43- )计的多种磷酸盐的测定方法。
本标准第一法适用于食品中磷酸盐、焦磷酸盐、三偏磷酸盐、三聚磷酸盐的测定,不适用于食品中添
加六偏磷酸盐的测定。
本标准第二法适用于食品中以磷酸根(PO43- )计的多种磷酸盐的测定。
第一法 食品中4种磷酸盐的测定
2 原理
试样经氢氧化钠溶液提取、固相萃取柱净化后,用氢氧化钾溶液淋洗,阴离子交换柱分离,电导检测
器检测。以保留时间定性,外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 氢氧化钠(NaOH)。
3.1.2 氢氧化钾(KOH)。
3.1.3 甲醇(CH3OH):色谱纯。
3.2 试剂配制
3.2.1 氢氧化钠溶液(10mmol/L):称取0.4g氢氧化钠,加水溶解并定容至1000mL。
3.2.2 氢氧化钠溶液(50mmol/L):称取2.0g氢氧化钠,加水溶解并定容至1000mL。
3.2.3 氢氧化钾溶液(2mol/L):称取112.0g氢氧化钾,加水溶解并定容至1000mL。
3.3 标准品
3.3.1 磷酸钠(Na3PO4,CAS号:7601-54-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准
物质。
3.3.2 焦磷酸钠(Na4P2O7,CAS号:7722-88-5),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标
准物质。
3.3.3 三偏磷酸钠[(NaPO3)3,CAS号:7785-84-4],纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准物质。
1
GB5009.256—2025
3.3.4 三聚磷酸钠(Na5P3O10,CAS号:7758-29-4),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 磷酸根标准储备溶液(1000mg/L):准确称取磷酸钠标准品0.173g(精确至0.0001g),用
10mmol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期
6个月。
3.4.2 焦磷酸根标准储备溶液(1000 mg/L):准确称取焦磷酸钠0.153g(精确至0.0001g),用
10mmol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含焦磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效
期6个月。
3.4.3 三偏磷酸根标准储备溶液(1000mg/L):将三偏磷酸钠在103℃±2℃烘箱中干燥3h,在干燥
器中冷却至室温后,准确称取三偏磷酸钠标准品0.132g(精确至0.0001g),用10mmol/L氢氧化钠溶
液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含三偏磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期6个月。
3.4.4 三聚磷酸根标准储备溶液(1000mg/L):将三聚磷酸钠在103℃±2℃烘箱中干燥3h,在干燥
器中冷却至室温后,准确称取三聚磷酸钠标准品0.148g(精确至0.0001g),用10mmol/L氢氧化钠溶
液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含三聚磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期6个月。
3.4.5 磷酸根、焦磷酸根、三偏磷酸根、三聚磷酸根混合标准中间溶液(100mg/L ):分别量取磷酸根、
焦磷酸根、三偏磷酸根、三聚磷酸根标准储备溶液各10.0 mL,用10 mmol/L 氢氧化钠溶液定容至
100mL。
3.4.6 混合标准系列工作溶液:分别量取混合标准中间溶液0 mL、0.03 mL、0.05 mL、0.10 mL、
0.50mL、1.00mL和2.00 mL,用10 mmol/L 氢氧化钠溶液定容至10 mL,配制成质量浓度分别为
0mg/L、0.30mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L和20.0mg/L的混合标准系列工
作溶液。临用现配。
3.5 材料
3.5.1 0.45μm 水溶性滤膜(带针头过滤器)。
3.5.2 净化柱:聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱、Ag柱和Na柱,或等效柱。
3.5.3 注射器:1.0mL和5.0mL。
注:所有玻璃器皿使用前均需要依次用2mol/L氢氧化钾溶液和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干
备用。
4 仪器和设备
4.1 离子色谱仪:配有电导检测器和抑制器。
4.2 食物粉碎机。
4.3 电热鼓风干燥箱。
4.4 超声波清洗器:可进行80℃控温,60Hz。
4.5 天平:感量为0.001g和0.0001g。
4.6 冷冻离心机:转速≥8000r/min,温度可调至4℃。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 水产、蛋、肉类及其制品等:取500g水产、蛋、肉或其制品的可食部分,捣碎混匀备用。
2
GB5009.256—2025
5.1.2 蔬菜、水果等:取可食部分500g,洗净、晾干、切碎、混匀,用组织搅拌机制成匀浆备用。
5.1.3 奶粉、乳及乳制品、饮料类等:通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直至样品均一化。
5.1.4 固体油脂、脂肪、可可制品、巧克力和巧克力制品、冷冻饮品等:取500g样品,-18 ℃冷冻后用
食物粉碎机粉碎搅匀备用。
5.1.5 杂粮、小麦粉及其制品、果冻、糖果、调味糖浆、蔬菜罐头、焙烤食品、膨化食品、熟制坚果与籽类
等:取500g可食部分用食物粉碎机搅匀备用。
5.1.6 调味料等:粉末状调味料通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀;固体大颗粒状调味料取
500g用食物粉碎机搅匀备用。
5.1.7 谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品等:通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分
混匀直至样品均一化。
5.2 样品前处理
5.2.1 样品的提取
5.2.1.1 蔬菜、水果、果冻、巧克力及糖果、杂粮、小麦粉及其制品、奶粉、乳及乳制品、饮料类等:称取
2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L氢氧化钠溶液洗入50mL比色管
中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶
液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上清液备用。
5.2.1.2 膨化食品、熟制坚果与籽类、谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品等:称取
2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L氢氧化钠溶液洗入25mL比色管
中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶
液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上清液备用。
5.2.1.3 油脂、脂肪、调味料等:称取1g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用
50mmol/L氢氧化钠溶液洗入50mL比色管中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振
摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4 ℃ 下,8000r/min 离心
10min,取上清液备用。
5.2.1.4 水产、蛋、肉类及其制品等:称取2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用
50mmol/L氢氧化钠溶液洗入100mL比色管中混匀定容至刻度,80 ℃超声提取30min,每隔5min
振摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4 ℃下,8000r/min离心
10min,取上清液备用。
5.2.2 样品的净化
取5.2.1中处理完成后的上清液15mL,通过0.45μm 水溶性滤膜针头过滤器、聚二乙烯基苯聚合
物反相填料柱,弃去前面3mL (如果氯离子大于100mg/L,则需要依次通过针头过滤器、聚二乙烯基
苯聚合物反相填料柱、Ag柱和Na柱,弃去前7mL),收集后面洗脱液待测。测定前应根据样品含量对
待测液进行适当稀释。
固相萃取柱使用前需进行活化,如使用聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱(1.0 mL)、Ag 柱
(1.0mL)、Na柱(1.0mL),其活化过程为:聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱(1.0mL)使用前依次用
10mL 甲醇、15mL水通过,静置活化30min。Ag柱(1.0mL)和Na柱(1.0mL)用10mL 水通过,静
置活化30min。
5.3 参考色谱条件
5.3.1 色谱柱:阴离子交换柱(4 mm×250 mm),保护柱使用相同填料的阴离子交换柱(4 mm×
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50mm),或性能相当的离子色谱柱。
5.3.2 淋洗液:氢氧化钾溶液,梯度淋洗时间及氢氧化钾浓度见表1;流速1.0mL/min。
5.3.3 抑制器:阴离子抑制器或等效抑制装置。
5.3.4 检测器:电导检测器,检测池温度为35℃。
5.3.5 柱温箱:柱温箱温度为30℃。
5.3.6 进样体积:100μL。
表1 梯度淋洗的时间及氢氧化钾的浓度
时间
min
氢氧化钾摩尔浓度
mmol/L 曲率(Curve)
0 20 5
22 20 5
25 50 5
45 50 5
55 75 5
57 20 5
60 20 5
5.4 标准曲线的制作
将标准系列工作液从低浓度到高浓度依次进样,测定相应的电导检测器的信号值,得到各浓度标准
溶液的色谱图。以标准工作液的质量浓度(mg/L)为横坐标,以峰面积(μs/cm)或峰高为纵坐标,绘制
标准曲线,并计算线性回归方程。参考色谱图及保留时间见附录A。
5.5 试样溶液的测定
将试样溶液在相同工作条件下注入离子色谱仪中,记录色谱图,以保留时间定性,测定样品的峰面
积(μs/cm)或峰高,根据标准曲线得到待测液中被测组分的浓度。
5.6 空白试验
空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。
6 分析结果的表述
试样中各种磷酸根含量按公式(1)计算。
Xi= ρi-ρ0i ×V
m ×1000 ……………………(1)
式中:
Xi ———样品中第i 个磷酸根含量,单位为克每千克(g/kg);
ρi ———样液中第i 个磷酸根测定值,单位为毫克每升(mg/L);
ρ0i ———样品空白液中第i 个磷酸根测定值,单位为毫克每升(mg/L);
V ———样品提取液定容体积,单位为毫升(mL);
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m ———样品称样质量,单位为克(g);
1000———换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。
若分析结果需要以磷酸根含量表示,则见附录B,将聚磷酸根含量乘以换算系数F。样品中总磷酸
根为各种聚磷酸根(除六偏磷酸根外)换算的磷酸根的总和。
7 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。
8 检出限与定量限
膨化食品、熟制坚果与籽类、谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品等:取样
2.5g,定容至50mL,测定前再稀释2.5倍,测定各聚磷酸根的检出限均为0.002g/kg,定量限均为
0.005g/kg。
蔬菜、水果、果冻、巧克力及糖果、杂粮、小麦粉及其制品、奶粉、乳及乳制品、饮料类等:取样
2.5g,定容至50 mL,测定前再稀释5倍,测定各聚磷酸根的检出限均为0.003g/kg,定量限均为
0.01g/kg。
油脂、脂肪、调味料等:取样1.0g,定容至50mL,水产、蛋、肉类及其制品等:取样2.5g,定容至
100mL,测定前再稀释2.5倍,测定各聚磷酸根的检出限均为0.006g/kg,定量限均为0.02g/kg。
第二法 食品中磷酸根(PO4
3- )总量的测定
9 原理
试样中各种磷酸盐经提取后,在酸性条件下转化为磷酸根(PO43- )离子,经阴离子交换柱分离,电
导检测器检测。根据保留时间定性,外标法定量。
10 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。
10.1 试剂
10.1.1 硝酸(HNO3):质量浓度为65%。
10.1.2 碳酸钠(Na2CO3)。
10.1.3 氢氧化钠(NaOH)。
10.1.4 氢氧化钾(KOH)。
10.2 试剂配制
10.2.1 硝酸溶液(体积分数30%):量取硝酸30 mL,缓缓加入50 mL 水中,待降至室温后稀释至
100mL。
10.2.2 氢氧化钠溶液(50mmol/L):同3.2.2。
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GB5009.256—2025
10.2.3 氢氧化钾溶液(2mol/L):同3.2.3。
10.2.4 碳酸钠(15mmol/L)-氢氧化钠(2mmol/L)混合溶液:分别称取1.590g碳酸钠和0.080g氢氧
化钠,于烧杯中溶解,降至室温后转移至容量瓶中,定容至1000mL。
10.3 标准品
磷酸钠(Na3PO4,CAS号:7601-54-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
10.4 标准溶液配制
10.4.1 磷酸根(PO43- )标准储备溶液(1000 mg/L):准确称取磷酸钠标准品0.173g(精确至
0.0001g),用水溶解并定容至100mL,此溶液每1L含磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期6个月。
10.4.2 磷酸根(PO43- )标准中间溶液(100 mg/L):准确吸取磷酸根(PO43- )标准储备溶液
1.00mL,加水定容至10mL,常温密闭保存,有效期6个月。
10.4.3 磷酸根(PO43- )标准系列工作溶液:准确吸取磷酸根(PO43- )标准中间溶液0mL、0.005mL、
0.01mL、0.05mL、0.10mL、0.50mL、1.00mL 和2.00mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度为
0mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L和20.0mg/L的磷酸
根(PO43- )标准系列工作溶液。临用现配。
10.5 材料
10.5.1 0.45μm 水溶性滤膜(带针头过滤器)。
10.5.2 具塞比色管:50mL。
10.5.3 注射器:1.0mL和5.0mL。
注:所有玻璃器皿使用前均需要依次用2mol/L氢氧化钾溶液和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干
备用。
11 仪器和设备
11.1 离子色谱仪:配有电导检测器和抑制器。
11.2 匀浆机。
11.3 食物粉碎机。
11.4 超声波清洗器:可进行80℃控温,60Hz。
11.5 天平:感量为0.001g和0.0001g。
11.6 冷冻离心机:转速大于8000r/min,温度可调至4℃。
11.7 恒温水浴锅:90℃±5℃。
11.8 涡旋混合器。
12 分析步骤
12.1 试样制备
同5.1。
12.2 样品前处理
称取样品1g~2g(可根据实际情况适当调整样品量,精确至0.001g)于50mL比色管(10.5.2)
中,加入50mmol/L氢氧化钠溶液45mL,涡旋混匀1min,80 ℃超声提取30min,每隔5min振摇
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GB5009.256—2025
1次,保持固相完全分散,冷却至室温后,用水定容至50 mL,摇匀后全部转移至50 mL 离心管中,
8000r/min离心5 min。量取提取液5.00 mL 至于另一个50 mL 比色管(10.5.2)中,加30%硝酸
(10.2.1)1mL,涡旋混匀,置于90℃±5℃水浴中加热60min,取出置于冷水中冷却至室温,加水定容
至刻度,摇匀,移取溶液2.00mL于10mL离心管中,用水稀释至刻度,将溶液置于冷冻离心机,4℃、
8000r/min离心5min,取上清液过0.45μm 滤膜,取适量上机测试。
12.3 参考色谱条件
12.3.1 氢氧化钾淋洗液体系
12.3.1.1 色谱柱:氢氧化物选择性、阴离子交换柱(250mm×4mm),保护柱使用相同填料的阴离子交
换柱(50mm×4mm),或性能相当的离子色谱柱。
12.3.1.2 淋洗液:氢氧化钾淋洗液,浓度为20mmol/L,流速为1.0mL/min。
12.3.1.3 抑制器:阴离子抑制器。
12.3.2 碳酸盐淋洗液体系
12.3.2.1 色谱柱:碳酸盐选择性、阴离子交换柱(4mm×150mm),保护柱使用相同填料的阴离子交换
柱(1mm×3.5mm),或性能相当的离子色谱柱。
12.3.2.2 淋洗液:碳酸钠(15mmol/L)+氢氧化钠(2mmol/L)混合淋洗液,流速0.6mL/min。
12.3.2.3 抑制器:阴离子抑制器。
12.3.3 检测器
电导检测器,检测池温度为35℃。
12.3.4 柱温箱
柱温箱温度为30℃。
12.3.5 进样体积
100μL。
12.4 标准曲线的制作
将标准系列工作液从低浓度到高浓度依次进样,测定相应的电导检测器的信号值,得到各浓度标准
溶液的色谱图。以标准工作液的质量浓度(mg/L)为横坐标,以峰面积或峰高为纵坐标,绘制标准曲
线,并计算线性回归方程。参考色谱图及保留时间见附录C。
12.5 试样溶液的测定
将试样溶液在相同工作条件下注入离子色谱仪中,记录色谱图,以保留时间定性,测定样品的峰面
积或峰高,根据标准曲线得到待测液中被测组分的浓度。
12.6 空白试验
空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。
13 分析结果的表述
试样中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)的含量按公式(2)计算。
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GB5009.256—2025
X = ρ-ρ0 ×V
m ×1000 ×f ……………………(2)
式中:
X ———样品中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)含量,单位为克每千克(g/kg);
ρ ———样液中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)测定值,单位为毫克每升(mg/L);
ρ0 ———样品空白液中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)测定值,单位为毫克每升(mg/L);
V ———样品提取液定容体积,单位为毫升(mL);
m ———样品称样质量,单位为克(g);
1000 ———换算系数;
f ———稀释倍数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。
14 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。
15 检出限与定量限
取样量2g,按样品前处理方法操作,蔬菜罐头、饮料、糖果、调味糖浆、果冻、油脂制品(仅限植脂
末)、可可制品、巧克力和巧克力制品检出限为0.06g/kg,定量限为0.12g/kg;其他食品检出限为
0.05g/kg,定量限为0.1g/kg。
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GB5009.256—2025
附 录 A
4种磷酸盐标准溶液离子色谱图
4种磷酸盐标准溶液离子色谱图见图A.1。
图A.1 4种磷酸盐标准溶液离子色谱图
9
GB5009.256—2025
附 录 B
聚磷酸根的换算系数
聚磷酸根换算为磷酸根的换算系数见表B.1。
表B.1 聚磷酸根换算为磷酸根的换算系数
聚磷酸根M [A] m F
磷酸根(PO4)3- 94.94 1 1
焦磷酸根(P2O7)4- 173.94 2 1.092
三偏磷酸根(P3O9)3- 236.91 3 1.203
三聚磷酸根(P3O10)5- 252.91 3 1.127
注:聚磷酸根换算为磷酸根的换算系数F 的计算方法见式(B.1)。
F =94.94× m
M [A] ……………………(B.1)
式中:
94.94———磷酸根的相对分子质量;
m ———聚磷酸根分子式中磷的摩尔系数;
M [A]———聚磷酸根的相对分子质量。
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GB5009.256—2025
附 录 C
磷酸盐标准溶液离子色谱图
磷酸盐标准溶液离子色谱图见图C.1和图C.2。
图C.1 磷酸盐标准溶液离子色谱图(氢氧化钾淋洗液体系)
图C.2 磷酸盐标准溶液离子色谱图(碳酸盐淋洗液体系)
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GB5009.256—2025
GB5009.256—2025
食品安全国家标准
食品中多种磷酸盐的测定
2025-03-16发布2025-09-16实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国家市场监督管理总局发布
前 言
本标准代替GB5009.256—2016《食品安全国家标准 食品中多种磷酸盐的测定》。
本标准与GB5009.256—2016相比,主要变化如下:
———更改了方法的适用范围;
———删除了六偏磷酸盐的测定;
———更改了方法原理的表述;
———增加了“第二法 食品中磷酸根(PO43- )总量的测定”。
Ⅰ
GB5009.256—2025
食品安全国家标准
食品中多种磷酸盐的测定
1 范围
本标准规定了食品中以磷酸根(PO43- )计的多种磷酸盐的测定方法。
本标准第一法适用于食品中磷酸盐、焦磷酸盐、三偏磷酸盐、三聚磷酸盐的测定,不适用于食品中添
加六偏磷酸盐的测定。
本标准第二法适用于食品中以磷酸根(PO43- )计的多种磷酸盐的测定。
第一法 食品中4种磷酸盐的测定
2 原理
试样经氢氧化钠溶液提取、固相萃取柱净化后,用氢氧化钾溶液淋洗,阴离子交换柱分离,电导检测
器检测。以保留时间定性,外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 氢氧化钠(NaOH)。
3.1.2 氢氧化钾(KOH)。
3.1.3 甲醇(CH3OH):色谱纯。
3.2 试剂配制
3.2.1 氢氧化钠溶液(10mmol/L):称取0.4g氢氧化钠,加水溶解并定容至1000mL。
3.2.2 氢氧化钠溶液(50mmol/L):称取2.0g氢氧化钠,加水溶解并定容至1000mL。
3.2.3 氢氧化钾溶液(2mol/L):称取112.0g氢氧化钾,加水溶解并定容至1000mL。
3.3 标准品
3.3.1 磷酸钠(Na3PO4,CAS号:7601-54-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准
物质。
3.3.2 焦磷酸钠(Na4P2O7,CAS号:7722-88-5),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标
准物质。
3.3.3 三偏磷酸钠[(NaPO3)3,CAS号:7785-84-4],纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准物质。
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GB5009.256—2025
3.3.4 三聚磷酸钠(Na5P3O10,CAS号:7758-29-4),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的
标准物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 磷酸根标准储备溶液(1000mg/L):准确称取磷酸钠标准品0.173g(精确至0.0001g),用
10mmol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期
6个月。
3.4.2 焦磷酸根标准储备溶液(1000 mg/L):准确称取焦磷酸钠0.153g(精确至0.0001g),用
10mmol/L氢氧化钠溶液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含焦磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效
期6个月。
3.4.3 三偏磷酸根标准储备溶液(1000mg/L):将三偏磷酸钠在103℃±2℃烘箱中干燥3h,在干燥
器中冷却至室温后,准确称取三偏磷酸钠标准品0.132g(精确至0.0001g),用10mmol/L氢氧化钠溶
液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含三偏磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期6个月。
3.4.4 三聚磷酸根标准储备溶液(1000mg/L):将三聚磷酸钠在103℃±2℃烘箱中干燥3h,在干燥
器中冷却至室温后,准确称取三聚磷酸钠标准品0.148g(精确至0.0001g),用10mmol/L氢氧化钠溶
液溶解并定容至100mL,此溶液每1L含三聚磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期6个月。
3.4.5 磷酸根、焦磷酸根、三偏磷酸根、三聚磷酸根混合标准中间溶液(100mg/L ):分别量取磷酸根、
焦磷酸根、三偏磷酸根、三聚磷酸根标准储备溶液各10.0 mL,用10 mmol/L 氢氧化钠溶液定容至
100mL。
3.4.6 混合标准系列工作溶液:分别量取混合标准中间溶液0 mL、0.03 mL、0.05 mL、0.10 mL、
0.50mL、1.00mL和2.00 mL,用10 mmol/L 氢氧化钠溶液定容至10 mL,配制成质量浓度分别为
0mg/L、0.30mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L和20.0mg/L的混合标准系列工
作溶液。临用现配。
3.5 材料
3.5.1 0.45μm 水溶性滤膜(带针头过滤器)。
3.5.2 净化柱:聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱、Ag柱和Na柱,或等效柱。
3.5.3 注射器:1.0mL和5.0mL。
注:所有玻璃器皿使用前均需要依次用2mol/L氢氧化钾溶液和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干
备用。
4 仪器和设备
4.1 离子色谱仪:配有电导检测器和抑制器。
4.2 食物粉碎机。
4.3 电热鼓风干燥箱。
4.4 超声波清洗器:可进行80℃控温,60Hz。
4.5 天平:感量为0.001g和0.0001g。
4.6 冷冻离心机:转速≥8000r/min,温度可调至4℃。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 水产、蛋、肉类及其制品等:取500g水产、蛋、肉或其制品的可食部分,捣碎混匀备用。
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GB5009.256—2025
5.1.2 蔬菜、水果等:取可食部分500g,洗净、晾干、切碎、混匀,用组织搅拌机制成匀浆备用。
5.1.3 奶粉、乳及乳制品、饮料类等:通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直至样品均一化。
5.1.4 固体油脂、脂肪、可可制品、巧克力和巧克力制品、冷冻饮品等:取500g样品,-18 ℃冷冻后用
食物粉碎机粉碎搅匀备用。
5.1.5 杂粮、小麦粉及其制品、果冻、糖果、调味糖浆、蔬菜罐头、焙烤食品、膨化食品、熟制坚果与籽类
等:取500g可食部分用食物粉碎机搅匀备用。
5.1.6 调味料等:粉末状调味料通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀;固体大颗粒状调味料取
500g用食物粉碎机搅匀备用。
5.1.7 谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品等:通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分
混匀直至样品均一化。
5.2 样品前处理
5.2.1 样品的提取
5.2.1.1 蔬菜、水果、果冻、巧克力及糖果、杂粮、小麦粉及其制品、奶粉、乳及乳制品、饮料类等:称取
2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L氢氧化钠溶液洗入50mL比色管
中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶
液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上清液备用。
5.2.1.2 膨化食品、熟制坚果与籽类、谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品等:称取
2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L氢氧化钠溶液洗入25mL比色管
中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶
液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上清液备用。
5.2.1.3 油脂、脂肪、调味料等:称取1g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用
50mmol/L氢氧化钠溶液洗入50mL比色管中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振
摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4 ℃ 下,8000r/min 离心
10min,取上清液备用。
5.2.1.4 水产、蛋、肉类及其制品等:称取2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用
50mmol/L氢氧化钠溶液洗入100mL比色管中混匀定容至刻度,80 ℃超声提取30min,每隔5min
振摇1次,使样品完全分散。冷却至室温后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4 ℃下,8000r/min离心
10min,取上清液备用。
5.2.2 样品的净化
取5.2.1中处理完成后的上清液15mL,通过0.45μm 水溶性滤膜针头过滤器、聚二乙烯基苯聚合
物反相填料柱,弃去前面3mL (如果氯离子大于100mg/L,则需要依次通过针头过滤器、聚二乙烯基
苯聚合物反相填料柱、Ag柱和Na柱,弃去前7mL),收集后面洗脱液待测。测定前应根据样品含量对
待测液进行适当稀释。
固相萃取柱使用前需进行活化,如使用聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱(1.0 mL)、Ag 柱
(1.0mL)、Na柱(1.0mL),其活化过程为:聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱(1.0mL)使用前依次用
10mL 甲醇、15mL水通过,静置活化30min。Ag柱(1.0mL)和Na柱(1.0mL)用10mL 水通过,静
置活化30min。
5.3 参考色谱条件
5.3.1 色谱柱:阴离子交换柱(4 mm×250 mm),保护柱使用相同填料的阴离子交换柱(4 mm×
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50mm),或性能相当的离子色谱柱。
5.3.2 淋洗液:氢氧化钾溶液,梯度淋洗时间及氢氧化钾浓度见表1;流速1.0mL/min。
5.3.3 抑制器:阴离子抑制器或等效抑制装置。
5.3.4 检测器:电导检测器,检测池温度为35℃。
5.3.5 柱温箱:柱温箱温度为30℃。
5.3.6 进样体积:100μL。
表1 梯度淋洗的时间及氢氧化钾的浓度
时间
min
氢氧化钾摩尔浓度
mmol/L 曲率(Curve)
0 20 5
22 20 5
25 50 5
45 50 5
55 75 5
57 20 5
60 20 5
5.4 标准曲线的制作
将标准系列工作液从低浓度到高浓度依次进样,测定相应的电导检测器的信号值,得到各浓度标准
溶液的色谱图。以标准工作液的质量浓度(mg/L)为横坐标,以峰面积(μs/cm)或峰高为纵坐标,绘制
标准曲线,并计算线性回归方程。参考色谱图及保留时间见附录A。
5.5 试样溶液的测定
将试样溶液在相同工作条件下注入离子色谱仪中,记录色谱图,以保留时间定性,测定样品的峰面
积(μs/cm)或峰高,根据标准曲线得到待测液中被测组分的浓度。
5.6 空白试验
空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。
6 分析结果的表述
试样中各种磷酸根含量按公式(1)计算。
Xi= ρi-ρ0i ×V
m ×1000 ……………………(1)
式中:
Xi ———样品中第i 个磷酸根含量,单位为克每千克(g/kg);
ρi ———样液中第i 个磷酸根测定值,单位为毫克每升(mg/L);
ρ0i ———样品空白液中第i 个磷酸根测定值,单位为毫克每升(mg/L);
V ———样品提取液定容体积,单位为毫升(mL);
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m ———样品称样质量,单位为克(g);
1000———换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。
若分析结果需要以磷酸根含量表示,则见附录B,将聚磷酸根含量乘以换算系数F。样品中总磷酸
根为各种聚磷酸根(除六偏磷酸根外)换算的磷酸根的总和。
7 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。
8 检出限与定量限
膨化食品、熟制坚果与籽类、谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品等:取样
2.5g,定容至50mL,测定前再稀释2.5倍,测定各聚磷酸根的检出限均为0.002g/kg,定量限均为
0.005g/kg。
蔬菜、水果、果冻、巧克力及糖果、杂粮、小麦粉及其制品、奶粉、乳及乳制品、饮料类等:取样
2.5g,定容至50 mL,测定前再稀释5倍,测定各聚磷酸根的检出限均为0.003g/kg,定量限均为
0.01g/kg。
油脂、脂肪、调味料等:取样1.0g,定容至50mL,水产、蛋、肉类及其制品等:取样2.5g,定容至
100mL,测定前再稀释2.5倍,测定各聚磷酸根的检出限均为0.006g/kg,定量限均为0.02g/kg。
第二法 食品中磷酸根(PO4
3- )总量的测定
9 原理
试样中各种磷酸盐经提取后,在酸性条件下转化为磷酸根(PO43- )离子,经阴离子交换柱分离,电
导检测器检测。根据保留时间定性,外标法定量。
10 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。
10.1 试剂
10.1.1 硝酸(HNO3):质量浓度为65%。
10.1.2 碳酸钠(Na2CO3)。
10.1.3 氢氧化钠(NaOH)。
10.1.4 氢氧化钾(KOH)。
10.2 试剂配制
10.2.1 硝酸溶液(体积分数30%):量取硝酸30 mL,缓缓加入50 mL 水中,待降至室温后稀释至
100mL。
10.2.2 氢氧化钠溶液(50mmol/L):同3.2.2。
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10.2.3 氢氧化钾溶液(2mol/L):同3.2.3。
10.2.4 碳酸钠(15mmol/L)-氢氧化钠(2mmol/L)混合溶液:分别称取1.590g碳酸钠和0.080g氢氧
化钠,于烧杯中溶解,降至室温后转移至容量瓶中,定容至1000mL。
10.3 标准品
磷酸钠(Na3PO4,CAS号:7601-54-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
10.4 标准溶液配制
10.4.1 磷酸根(PO43- )标准储备溶液(1000 mg/L):准确称取磷酸钠标准品0.173g(精确至
0.0001g),用水溶解并定容至100mL,此溶液每1L含磷酸根1.0g。常温密闭保存,有效期6个月。
10.4.2 磷酸根(PO43- )标准中间溶液(100 mg/L):准确吸取磷酸根(PO43- )标准储备溶液
1.00mL,加水定容至10mL,常温密闭保存,有效期6个月。
10.4.3 磷酸根(PO43- )标准系列工作溶液:准确吸取磷酸根(PO43- )标准中间溶液0mL、0.005mL、
0.01mL、0.05mL、0.10mL、0.50mL、1.00mL 和2.00mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度为
0mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L和20.0mg/L的磷酸
根(PO43- )标准系列工作溶液。临用现配。
10.5 材料
10.5.1 0.45μm 水溶性滤膜(带针头过滤器)。
10.5.2 具塞比色管:50mL。
10.5.3 注射器:1.0mL和5.0mL。
注:所有玻璃器皿使用前均需要依次用2mol/L氢氧化钾溶液和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干
备用。
11 仪器和设备
11.1 离子色谱仪:配有电导检测器和抑制器。
11.2 匀浆机。
11.3 食物粉碎机。
11.4 超声波清洗器:可进行80℃控温,60Hz。
11.5 天平:感量为0.001g和0.0001g。
11.6 冷冻离心机:转速大于8000r/min,温度可调至4℃。
11.7 恒温水浴锅:90℃±5℃。
11.8 涡旋混合器。
12 分析步骤
12.1 试样制备
同5.1。
12.2 样品前处理
称取样品1g~2g(可根据实际情况适当调整样品量,精确至0.001g)于50mL比色管(10.5.2)
中,加入50mmol/L氢氧化钠溶液45mL,涡旋混匀1min,80 ℃超声提取30min,每隔5min振摇
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1次,保持固相完全分散,冷却至室温后,用水定容至50 mL,摇匀后全部转移至50 mL 离心管中,
8000r/min离心5 min。量取提取液5.00 mL 至于另一个50 mL 比色管(10.5.2)中,加30%硝酸
(10.2.1)1mL,涡旋混匀,置于90℃±5℃水浴中加热60min,取出置于冷水中冷却至室温,加水定容
至刻度,摇匀,移取溶液2.00mL于10mL离心管中,用水稀释至刻度,将溶液置于冷冻离心机,4℃、
8000r/min离心5min,取上清液过0.45μm 滤膜,取适量上机测试。
12.3 参考色谱条件
12.3.1 氢氧化钾淋洗液体系
12.3.1.1 色谱柱:氢氧化物选择性、阴离子交换柱(250mm×4mm),保护柱使用相同填料的阴离子交
换柱(50mm×4mm),或性能相当的离子色谱柱。
12.3.1.2 淋洗液:氢氧化钾淋洗液,浓度为20mmol/L,流速为1.0mL/min。
12.3.1.3 抑制器:阴离子抑制器。
12.3.2 碳酸盐淋洗液体系
12.3.2.1 色谱柱:碳酸盐选择性、阴离子交换柱(4mm×150mm),保护柱使用相同填料的阴离子交换
柱(1mm×3.5mm),或性能相当的离子色谱柱。
12.3.2.2 淋洗液:碳酸钠(15mmol/L)+氢氧化钠(2mmol/L)混合淋洗液,流速0.6mL/min。
12.3.2.3 抑制器:阴离子抑制器。
12.3.3 检测器
电导检测器,检测池温度为35℃。
12.3.4 柱温箱
柱温箱温度为30℃。
12.3.5 进样体积
100μL。
12.4 标准曲线的制作
将标准系列工作液从低浓度到高浓度依次进样,测定相应的电导检测器的信号值,得到各浓度标准
溶液的色谱图。以标准工作液的质量浓度(mg/L)为横坐标,以峰面积或峰高为纵坐标,绘制标准曲
线,并计算线性回归方程。参考色谱图及保留时间见附录C。
12.5 试样溶液的测定
将试样溶液在相同工作条件下注入离子色谱仪中,记录色谱图,以保留时间定性,测定样品的峰面
积或峰高,根据标准曲线得到待测液中被测组分的浓度。
12.6 空白试验
空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。
13 分析结果的表述
试样中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)的含量按公式(2)计算。
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GB5009.256—2025
X = ρ-ρ0 ×V
m ×1000 ×f ……………………(2)
式中:
X ———样品中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)含量,单位为克每千克(g/kg);
ρ ———样液中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)测定值,单位为毫克每升(mg/L);
ρ0 ———样品空白液中磷酸盐(以磷酸根PO43- 计)测定值,单位为毫克每升(mg/L);
V ———样品提取液定容体积,单位为毫升(mL);
m ———样品称样质量,单位为克(g);
1000 ———换算系数;
f ———稀释倍数。
计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留3位有效数字。
14 精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。
15 检出限与定量限
取样量2g,按样品前处理方法操作,蔬菜罐头、饮料、糖果、调味糖浆、果冻、油脂制品(仅限植脂
末)、可可制品、巧克力和巧克力制品检出限为0.06g/kg,定量限为0.12g/kg;其他食品检出限为
0.05g/kg,定量限为0.1g/kg。
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附 录 A
4种磷酸盐标准溶液离子色谱图
4种磷酸盐标准溶液离子色谱图见图A.1。
图A.1 4种磷酸盐标准溶液离子色谱图
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附 录 B
聚磷酸根的换算系数
聚磷酸根换算为磷酸根的换算系数见表B.1。
表B.1 聚磷酸根换算为磷酸根的换算系数
聚磷酸根M [A] m F
磷酸根(PO4)3- 94.94 1 1
焦磷酸根(P2O7)4- 173.94 2 1.092
三偏磷酸根(P3O9)3- 236.91 3 1.203
三聚磷酸根(P3O10)5- 252.91 3 1.127
注:聚磷酸根换算为磷酸根的换算系数F 的计算方法见式(B.1)。
F =94.94× m
M [A] ……………………(B.1)
式中:
94.94———磷酸根的相对分子质量;
m ———聚磷酸根分子式中磷的摩尔系数;
M [A]———聚磷酸根的相对分子质量。
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附 录 C
磷酸盐标准溶液离子色谱图
磷酸盐标准溶液离子色谱图见图C.1和图C.2。
图C.1 磷酸盐标准溶液离子色谱图(氢氧化钾淋洗液体系)
图C.2 磷酸盐标准溶液离子色谱图(碳酸盐淋洗液体系)
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