NY/T 4496-2025 白菜型油菜品种鉴定 SSR分子标记法

１　范围
本文件规定了利用简单重复序列(SSR)进行白菜型油菜(brassiacampestris L?)品种鉴定的术语和
定义、缩略语、原理、主要仪器设备及试剂、溶液配置、引物信息及使用、参照品种及使用、操作程序、结果判
定与表述.
本文件适用于白菜型油菜品种的DNA 分子数据采集和品种鉴定.
２　规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文
件.
GB/T３５４３?２农作物种子检验规程　扦样
GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法
NY/T２５９４植物品种鉴定　DNA 分子标记法　总则
３　术语和定义
NY/T２５９４规定的术语和定义适用于本文件.
４　缩略语
下列缩略语适用于本文件.
APS:过硫酸铵(ammoniumpersulphate).
bp:碱基对(basepair).
CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammoniumbromide).
DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid).
dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyＧribonucleosidetriphosphates).
EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid).
PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis).
PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction).
SSR:简单重复序列(simplesequencerepeat).
Taq酶:耐热DNA 聚合酶(TaqＧDNApolymerase).
TBE:三羟甲基氨基甲烷硼酸盐乙二胺四乙酸(TrisＧborateＧEDTA).
TE:三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸(TrisＧEDTA).
TEMED:四甲基乙二胺(N,N,N′,N′Ｇtetramethylethylenediamine).
Tris:三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)methylaminomethaneTHAM).
５　原理
白菜型油菜品种基因组中存在着大量能够稳定遗传的SSR 标记,不同白菜型油菜品种在同一SSR
的重复次数存在差异,这种差异可通过PCR扩增及电泳方法进行检测,进而区分不同的品种.
６　主要仪器设备及试剂
主要仪器设备及试剂见附录A.
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７　溶液配制
溶液配制方法见附录B.
８　引物信息及使用
引物名单及序列见附录C,引物相关信息见附录D.利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测时选择普通
引物;利用荧光毛细管电泳检测时选择荧光标记引物,荧光标记位于正向引物５′端,推荐的荧光标记见附
录D.可利用附录C中的引物序贯检测,当检测到的差异位点数能判定送检样品与对照样品不同时,停止
检测.
９　参照品种及使用
１参照品种用于辅助确定送检样品在某个位点的等位变异,宜与送检样品同时检测,参照品种相关信
息见附录E.
１０　操作程序
１０?１
样品准备
送验样品可为种子、幼苗、叶片等组织或器官.种子样品需扦样时,应符合GB/T３５４３?２的规定.每
份样品不少于３０个个体,等量混合分析,必要时进行个体检测.
１０?２
DNA 提取
将混合样品在液氮中研磨至粉末,迅速取约２００mg粉末置于２?０mL离心管中;每管加入６００μL
６５℃预热的CTAB提取液,充分混合,６５℃水浴４５min~６０min,每间隔１５min轻缓颠倒混匀,水浴后
１２０００rpm 离心１０min.吸取上清液转移至新的离心管中,每管加入与提取液等体积的三氯甲烷和异戊
醇,轻缓混匀后静置１０min;１２０００rpm 离心１０min后.吸取上清液至新的离心管中,加入等体积预冷
的异丙醇,轻轻颠倒混匀,－２０℃放置３０min,DNA 沉淀后１２０００rpm 离心１０min.弃上清液,用体积
分数为７０％的乙醇溶液洗涤沉淀２遍,晾干,加入１００μL双蒸水或TE缓冲液充分溶解.检测DNA 浓
度和质量,－２０℃保存备用.
注１:以上为推荐的DNA提取方法,DNA质量能够满足PCR扩增要求的其他DNA提取方法均适用于本标准.DNA
溶液的紫外吸光度OD２６０与OD２８０的比值宜介于１?７~２?０之间.
注２:三氯甲烷和异戊醇混合液中三氯甲烷与异戊醇的体积比为２４∶１.
１０?３
PCR 扩增
１０?３?１　反应体系
PCR扩增反应体系的总体积和各组分的终浓度参照表１配制,可以依据试验条件调整.
表１　PCR 扩增反应体系
反应组分原浓度终浓度反应体积(μL)
１０×缓冲液(含MgCl２) １０× １× １?０
dNTPs ２?５mmol/L ０?１５mmol/L ０?６
Taq 酶５U/μL ０?５U/μL ０?１ 正向引物５μmol/L ０?２５mmol/L ０?５ 反向引物５μmol/L ０?２５mmol/L ０?５
DNA ２５ng/μL ２?５ng/μL １ 双蒸水/ / ６?３ 总体积１０ 注:反应组分的原浓度、体积为参考值.
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１０?３?２　反应程序
推荐反应程序为:９４℃预变性２min;９４℃变性４０s,６０℃退火３０s,７２℃延伸４５s,共３５个循环;７２℃
延伸５min,产物４℃保存.
反应参数可根据PCR扩增仪型号、酶、引物等不同而做适当的调整.
１０?４
PCR 产物检测
１０?４?１　垂直板变性PAGE
１０?４?１?１　制胶
用洗涤剂将玻璃板清洗干净,再用双蒸水、无水乙醇依次擦洗２遍.玻璃板干燥后,将０?５mL亲和
硅烷工作液均匀涂在长玻璃板上,将０?５mL剥离硅烷工作液均匀涂在带凹槽的短玻璃板上.操作过程
中应防止两块玻璃板互相污染.玻璃板彻底干燥后,将０?４mm 厚的塑料隔条整齐放在长玻璃板两侧,盖
上凹槽短玻璃板,用夹子固定,用水平仪调平.取１００mL质量分数为６％ 的变性PAGE胶溶液,加入５０μL
四甲基乙二胺(TEMED)和５００μL 质量分数为１０ ％的过硫酸铵(APS),迅速混匀,将胶灌入玻璃胶室,
灌胶过程中应防止出现气泡.待胶室灌满后,在凹槽处将０?４mm 厚鲨鱼齿梳平齐端向里轻轻插入胶液
约４mm.室温聚合１h以上,胶聚合后,清理胶板表面溢出的胶液,轻轻拔出梳子,用水洗净备用.
注:聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同仪器设备进行调整.
１０?４?１?２　变性
在１０μLPCR产物中加入２μL６×加样缓冲液,混匀.在PCR扩增仪上运行９５℃变性５min,４℃
冷却１０min以上备用.
１０?４?１?３　电泳
将胶板安装于电泳槽上,在电泳正极槽和负极槽各加入６００mL的１×TBE 缓冲液,使其没过电极
线.８５W 恒功率预电泳１０min~２０min.用移液器清除凝胶顶端气泡和杂质.将样品梳插入凝胶约
１mm~２mm.每一个加样孔点入２μL~３μL样品,除送检样品外,还宜同时加入参照品种扩增产物.
８５W 恒功率电泳,电泳时间参考二甲苯青指示带移动的位置和扩增产物预期片段大小范围(参见附录
D).二甲苯青指示带在质量分数为６％PAGE胶电泳的泳动位置与２３０bp扩增产物泳动的位置大致相
当.扩增产物片段大小在(１００±３０)bp、(１５０±３０)bp、(２００±３０)bp、(２５０±３０)bp范围的,电泳参考
时间分别为１?５h、２?０h、２?５h、３?５h,当等位变异碱基对数差异较小时,可适当延长电泳时间.电泳参考
时间约为１h~２?５h(电泳时间取决于扩增片段的大小范围).电泳结束后关闭电源,取下玻璃板并轻轻
撬开,凝胶附着在长玻璃板上.
１０?４?１?４　银染
将附着凝胶的长玻璃板胶面向上浸入固定液中,轻轻晃动３min后取出,在双蒸水中快速漂洗,时间
不超过１０s;将胶板放入染色液中,轻轻晃动５min~１０min后取出,在双蒸水中快速漂洗,时间不超过１０s;
将胶板放入显影液中,轻摇晃动待条带清晰后取出,再迅速放入固定液中定影５min取出,在双蒸水中漂
洗１min;取出胶板,晾干,放在胶片观察灯上观察,记录结果,拍照保存.
注:固定液、染色液、双蒸水和显影液的用量,以淹没胶面为准.
１０?４?２　荧光毛细管电泳
１０?４?２?１　PCR产物样品准备
按照预先确定的引物分组(见附录F),分别取等体积的同一组中不同荧光标记引物的扩增产物,混匀
稀释.从混合液中吸取１μL加入到DNA 分析仪专用深孔板孔中.
除待测样品外,每个SSR位点还应同时包括２~３个参照品种的扩增产物.
注:稀释倍数通过荧光毛细管电泳预实验确定.
１０?４?２?２　变性
上样板各孔分别加入０?１μL分子量内标和８?９μL去离子甲酰胺,在PCR扩增仪上９５℃变性５min,取
出后立即置于冰上,冷却１０min以上,瞬时离心１０s后备用.
１０?４?２?３　电泳
按照DNA 分析仪操作手册电泳,并保存电泳原始数据文件.
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１０?５　数据分析
１０?５?１　等位变异确定与记录
每个SSR位点的等位变异以扩增片段大小的形式表示,详见附录D.对于变性PAGE,将送检样品
在某一位点扩增片段的迁移位置与对应的参照品种进行比较,确定送检样品在该位点的等位变异.对于
荧光毛细管电泳,通过参照品种消除不同批次或者不同型号DNA 分析仪可能存在的系统误差,使用片段
分析软件读取送检样品在该位点的等位变异.
纯合位点的等位变异数据记为X/X,其中X为该位点等位变异大小;杂合位点的等位变异数据记录
为X/Y,其中X、Y分别为该位点上的两个等位变异大小,小片段数据在前,大片段数据在后.缺失位点
的等位变异数据记录为０/０.
示例１:样品在某个位点上仅出现一个等位变异,为１６０bp,则该位点的等位变异数据记录为１６０/１６０.
示例２:样品在某个位点上有两个等位变异,分别为１６０bp、１６５bp,则该位点的等位变异数据记录为１６０/１６５.
１０?５?２　数据比对与差异位点统计
逐一比对送检样品与对照样品每个位点的等位变异数据,按照位点相同、位点差异、数据缺失、无法判
定情形,记录每个位点的比对结果,统计检测位点数和差异位点数.
１１　结果判定与表述
１１?１
判定规则
当差异位点数大于２,判定为“不同”;当差异位点数小于等于２,判定为“疑同”.
１１?２
结果表述
送检样品与对照样品(或对照样品品种指纹)采用检
测,检测位点数为,差异位点数为,判定为.
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附　录　A
(规范性)
主要仪器设备及试剂

A?１　主要仪器设备
A?１?１　PCR扩增仪.
A?１?２　高压电泳仪:最高电压不低于２０００V,具有恒电压、恒电流和恒功率功能.
A?１?３　电泳槽及配套的制胶附件
A?１?４　离心机.
A?１?５　水平摇床.
A?１?６　胶片观察灯.
A?１?７　电子天平:感量为０?１g和０?０１g.
A?１?８　微量移液器:规格分别为１０μL、２０μL、１００μL、２００μL、１０００μL,连续可调.
A?１?９　磁力搅拌器.
A?１?１０　核酸浓度测定仪或超微量紫外分光光度计.
A?１?１１　微波炉.
A?１?１２　高压灭菌锅.
A?１?１３　酸度计.
A?１?１４　水浴锅.
A?１?１５　低温冰箱.
A?１?１６　制冰机.
A?１?１７　凝胶成像系统或紫外透射仪.
A?１?１８　DNA 分析仪:基于毛细管电泳,有片段分析功能和数据分析软件,最低区分力１bp.
A?１?１９　其他相关仪器和设备.
A?２　主要试剂
除非另有说明,均使用分析纯试剂.
A?２?１　十六烷基三甲基溴化铵(CTAB,C１６H３３(CH３)３NBr,CAS号:５７Ｇ０９Ｇ０).
A?２?２　三氯甲烷(CHCl３,CAS号:６７Ｇ６６Ｇ３).
A?２?３　异戊醇(C５H１２O,CAS号:１２３Ｇ５１Ｇ３).
A?２?４　异丙醇[(CH３)２CHOH,CAS号:６７Ｇ６３Ｇ０].
A?２?５　乙二胺四乙酸二钠(EDTAＧNa,C１０H１４N２Na２O８,CAS号:１３９Ｇ３３Ｇ３).
A?２?６　三羟甲基氨基甲烷(Tris,C４H１１NO３,CAS号:７７Ｇ８６Ｇ１).
A?２?７　浓盐酸(HCl,CAS号:７６４７Ｇ０１Ｇ０).
A?２?８　氢氧化钠(NaOH,CAS号:１３１０Ｇ７３Ｇ２).
A?２?９　１０× PCR缓冲液:含Mg２＋ ２５mmol/L.
A?２?１０　４种脱氧核糖核苷酸:dATP、dTTP、dGTP、dCTP.
A?２?１１　SSR引物.
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A?２?１２　氯化钠(NaCl,CAS号:７６４７Ｇ１４Ｇ５).
A?２?１３　TaqDNA 聚合酶(Taq 酶,CAS号:９０１２Ｇ９０Ｇ２).
A?２?１４　琼脂糖(C２４H３８O１９,CAS号:９０１２Ｇ３６Ｇ６).
A?２?１５　DNA Marker:DNA 片段分布范围至少在５０bp~５００bp.
A?２?１６　甲酰胺(CH３NO,CAS号:７５Ｇ１２Ｇ７).
A?２?１７　溴酚蓝(C１９H１０Br４O５S,CAS号:１１５Ｇ３９Ｇ９).
A?２?１８　二甲苯青(C２５H２７N２NaO６S２,CAS号:２６５０Ｇ１７Ｇ１).
A?２?１９　甲叉双丙烯酰胺[(H２C＝CHCONH)２CH２,CAS号:１１０Ｇ２６Ｇ９].
A?２?２０　丙烯酰胺(C３H５NO,CAS号:７９Ｇ０６Ｇ１).
A?２?２１　硼酸(H３BO３,CAS号:１００４３Ｇ３５Ｇ３).
A?２?２２　尿素(CH４N２O,CAS号:５７Ｇ１３Ｇ６).
A?２?２３　亲和硅烷.
A?２?２４　二甲基二氯硅烷(C２H６Cl２Si,CAS号:７５Ｇ７８Ｇ５).
A?２?２５　无水乙醇(C２H６O,CAS号:６４Ｇ１７Ｇ５).
A?２?２６　四甲基乙二胺(TEMED,C６H１６N２,CAS号:１１０Ｇ１８Ｇ９).
A?２?２７　过硫酸铵[APS,(NH４)２S２O８,CAS号:７７２７Ｇ５４Ｇ０].
A?２?２８　冰醋酸(CH３COOH,CAS号:６４Ｇ１９Ｇ７).
A?２?２９　硝酸银(AgNO３,CAS号:７７６１Ｇ８８Ｇ８).
A?２?３０　甲醛(HCHO,CAS号:５０Ｇ００Ｇ０).
A?２?３１　DNA 分析仪用丙烯酰胺胶液.
A?２?３２　DNA 分析仪用分子量内标.
A?２?３３　DNA 分析仪用电泳缓冲液.
A?２?３４　DNA 分析仪用光谱校准基质,包括６ＧFAM、TAMRA、HEX和ROX等四种荧光标记.
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附　录　B
(规范性)
溶液配制

试剂配制用水需符合标准GB/T６６８２的要求.
B?１　DNA 提取溶液的配制
B?１?１　０?５mol/LEDTA 溶液
称取１８６?１gNa２EDTA?２H２O 溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加NaOH 调pH 至８?０,加水定
容至１０００mL,１２１℃ 高压灭菌２０min.
B?１?２　０?５mol/LHCl溶液
量取２５mL浓盐酸(３６％~３８％),加水定容至５００mL.
B?１?３　１mol/LNaOH 溶液
称取４０?０gNaOH 溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加水定容至１０００mL.
B?１?４　１moI/LTrisＧHCl溶液
称取１２１?１gTris碱溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加HCl调pH 至８?０,加水定容至１０００mL,
１２１℃高压灭菌２０min.
B?１?５　CTAB 提取液
称取２０?０gCTAB、８１?７gNaCl置于１０００mL烧杯中,量取１００mL１mol/LTrisＧHCl溶液和４０mL
０?５mol/LEDTA 溶液倒入烧杯中,加７００mL水,充分搅拌溶解,加水定容至１０００mL,１２１℃高压灭菌
２０min.
B?１?６TE缓冲液
量取５mL１mol/LTrisＧHCl溶液和１mL０?５mol/LEDTA 溶液,加水定容至５００mL,１２１℃高压
灭菌２０min,４℃保存.
B?２　PCR 扩增试剂的配制
B?２?１　dNTPs溶液
分别配制dATP、dTTP、dCTP、dGTP终浓度为１００mmol/L的储存液.各取２０μL混合,加７２０μL
TE缓冲液定容,配制成每种脱氧核糖核苷酸终浓度为２?５mmol/L的工作液,１２１℃高压灭菌２０min,－
２０℃保存.
B?２?２　SSR 引物溶液
开盖前瞬时离心１０s,按照说明书加水分别配制正向引物和反向引物终浓度为１００μmol/L的储存
液,各取１０μL储存液,加８０μL水配制成终浓度１０μmol/L的工作液.
B?３　变性PAGE溶液的配制
B?３?１　４０％丙烯酰胺溶液
称取１９０?０g丙烯酰胺和１０?０g甲叉双丙烯酰胺溶于４００mL水中,充分搅拌溶解,加水定容至
５００mL,置于棕色瓶中,４℃储存.
B?３?２　６％变性聚丙烯酰胺凝胶溶液
称取４２０?０g尿素置于１０００mL烧杯中,加入１００mL１０× TBE缓冲液和１５０mL质量分数为４０％
的丙烯酰胺溶液,定容至１０００mL.
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B?３?３　亲和硅烷缓冲液
分别量取９９?５mL无水乙醇和５００μL冰醋酸,加水定容至１００mL.
B?３?４　亲和硅烷工作液
分别量取１mL亲和硅烷缓冲液和５μL亲和硅烷原液,混匀.
B?３?５　剥离硅烷工作液
分别量取２５mL二甲基二氯硅烷和７５mL三氯甲烷,混匀.
B?３?６　质量分数为１０％的APS溶液
称取１?０gAPS溶于１０mL水中,混匀,于４℃保存(不超过５天).
B?３?７　１０×TBE 缓冲液
称取Tris１０８g,硼酸５５g,溶于８００mL水中,加入３７mLEDTA 溶液(０?５mol/L,pH８?０),定容至
１L.
B?３?８　１×TBE缓冲液
量取５０mL１０× TBE缓冲液,加水定容至５００mL,混匀.
B?３?９　６×加样缓冲液
分别称取０?２５g溴酚蓝和０?２５g二甲苯青,加入９８mL去离子甲酰胺和２mLEDTA 溶液(０?５mol/L,
pH８?０),搅拌溶解.
B?４　银染溶液的配制
B?４?１　固定液
量取１００mL冰醋酸,加水定容至１L.
B?４?２　染色液
称取１g硝酸银,加水定容至１L.
B?４?３　显影液
称取１０g氢氧化钠溶于１L水中,用前加２mL甲醛.
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附　录　C
(规范性)
引物名单及序列

引物名单及序列见C?１.
表C?１　引物名单及序列
引物编号引物名称染色体上游引物序列(５′→３′) 下游引物序列(５′→３′)
１ ACMP０００６４ A０５ GCATCATCTTCGTCATTTCG GGGTCACCGAGTTATGCAA
２ ACMP０００８５ A０３ CTTCACGTTGCAGGTTTCC TGCTAAATGCTCTCGTCGTC
３ ACMP００２５３ A０３ TCCTCTCCTTCAGACACAGC CAGCATCCATTGGTTCATTC
４ ACMP００３７４ A０２ TTCCTTATTGGGATGTCGTG CTCGTTGTTGAGGAAGCAAA
５ ACMP００４２４ A０８ CATCAGACGGTGGATTTGAG CCGATCCTCTCTTCTCTTGG
６ ACMP００５２８ A０２ ACAGAGTCCAAGCAGCCATA AGAAGGCTCCATCCTCTTCA
７ ACMP００７１６ 未知GTGGAGAAACGAGCGGTAAT AGCAGGCTTCAATGTGGAC
８ ACMP００７４９ A０２ AAGGGATCGACGAACATCTC ACGCATGTCACACCAACATA
９ ACMP００７５９ A０１ GTGCTGGCCTCACACAGTA TCAACAACTACGGACCTGGA
１０ ACMP００８３９ A０７ ATCTCACGGTTGAAGCACCT GCAGTTCCATCATTGGTTTG
１１ sauＧum１４６ A０３ CTCGCAAAATCCCTTCTTCG CATATCGCTCGAGTTGCAGA
１２ sauＧum４４５ A０９ AACAAAAACCTTGGCTCCCC ACGCTCCACTGAAAGACGTTAC
１３ CALSSR A０８ GTTAAGTGTGGCGTTAGAGG CCTTGGTACATGCCACTGAA
１４ BnGMS１６５ A０４ ATTGACGCACTGTCTTCTCT AAACAATAAGCCAACGAAAG
１５ BnGMS１７５ A０２ TGATCTTCCTGAGAATCAGC GAGGAAGAAGGAGAGAGGAA
１６ BnGMS１８１ A０９ GTAAATGAAGGAATGGGTCA GTCCTTCCTCTGTTTCTCCT
１７ CX４８ A０６ CAACACAATACAAGAAACAAACAAA CGCGAAAGAGAAGTTCGAGT
１８ CX８１ A０５ TGCCCTTCTTTCATCTGCTT TCTGTTCCCTCATTCACCAA
１９ CX１１１ A０２ TGCGTTGTGGTCTGAGAATC AGCCTCACATCAGCGTCTCT
２０ CX１１９ A０３ GGTGGTTTCGCTAGAGGATG CTGCGAATTCAACCGTCTCT
２１ CX６３ A０８ CAGAACCAGTCGCCACATAA CTGCTCTCGAGTATGCCTGA
２２ Ra１ＧH０８ A０６ GTCGATGATCACGGAAGAGG CTTGACAGCTACGGTTTGTCC
２３ A７７０９６ A０８ TAGGACACGTGACAAAACTTCAT TATCGATGGTATCAAAGAATGGA
２４ CB１０２９８ A０９ CAACATCCCAGCAGGTAA CCGTAGCTGTGCTCATTC
２５ CB１０１０９ A１０ GTGTAGCCAGCTTGATCCT CTTCTTCTGATGCAGCAGTG
２６ CB１０５２４ A１０ ATGGAAGGCAACGATTCT TTCTGTGCTAGGTCTGCC
２７ Na１２D０４ A０６ ACGGAGTGATGATGGGTCTC CCTCAATGAAACTGAAATATGTGTG
２８ Na１４D０７ A０１ GCATAACGTCAGCGTCAAAC CTGCGGGACACATAACTTTG
２９ Na１４G１０ A０３ ACGAAGTGGGTTAGTAGGCG GAAGCCTTTCTCCACCATTG
３０ Ol１０F１２ A０８ TCCATGTTTCATGTTGGAGG CTCTCCGGCTTCACTTTCC
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附　录　D
(资料性)
引物相关信息

引物相关信息见表D?１.
表D?１　引物相关信息
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围(bp) 主要等位变异(bp) 参照品种
１ ACMP０００６４ TAMRA ２３０~２６３
２３０ 浩油６号
２３６ 浩油６号
２４０ 宁强苍社油菜
２５０ 泾阳油菜
２５３ 银黄
２５６ 芮城五角籽
２６３ 泾阳油菜
２ ACMP０００８５ HEX １５６~１７０
１５６ 延油３号
１６２ 花籽北方白
１６４ 云梦剑杆白
１６８ 浩油６号
１７０ 宁强苍社油菜
３ ACMP００２５３ TAMRA １９５~２０１
１９５ ９８５８
１９７ 青油２４１
１９９ 芮城五角籽
２０１ 门源小油菜
４ ACMP００３７４ ROX ２７２~２９３
２７２ 北山油菜
２７５ 天油１号
２８３ 延油３号
２８７ 延油３号
２９０ 硖石向阳籽
２９３ 芮城五角籽
５ ACMP００４２４ HEX １３５~１５１
１３５ 云梦剑杆白
１４０ 天油３号
１４３ 天油４号
１４６ 花籽北方白
１４８ 延油３号
１５１ 宁强苍社油菜
６ ACMP００５２８ ６ＧFAM ２８８~３００ ２８８ 芮城五角籽
２９１ 泾阳油菜
６ ACMP００５２８ ６ＧFAM ２８８~３００ ２９７ 紫株分混
３００ 兴义白油菜
７ ACMP００７１６ HEX １８７~２１１
１８７ 芮城五角籽
２０５ 云梦剑杆白
２０８ 延油３号
２１１ 皖油１号
８ ACMP００７４９ ６ＧFAM １７３~１７９
１７３ 延油３号
１７５ 浩油５号
１７７ 兴义白油菜
１７９ 花籽北方白
１０
NY/T４４９６—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围(bp) 主要等位变异(bp) 参照品种
９ ACMP００７５９ TAMRA １７９~１９３
１７９ 云梦剑杆白
１８１ 芮城五角籽
１８３ 泾阳油菜
１８５ 青油９号
１８７ 青油９号
１８９ 北油１号
１９１ 芮城五角籽
１９３ 硖石向阳籽
１０ ACMP００８３９ ROX ３４８~３９２
３４８ 云梦剑杆白
３５０ 天油４号
３６２ 宁强苍社油菜
３６４ 芮城五角籽
３７４ 浩油４号
３７７ 延油３号
３８０ 白杂１９号
３９２ 芮城五角籽
１１ sauＧum１４６ ６ＧFAM １５４~１７０
１５４ 皖油１号
１６０ 芮城五角籽
１６４ 延油３号
１７０ 兴义白油菜
１２ sauＧum４４５ TAMRA ２９３~３１４
２９３ 浩油１１号
２９５ 银黄
２９７ 芮城五角籽
３０５ 兴义白油菜
３０７ 天油４号
１２ sauＧum４４５ TAMRA ２９３~３１４ ３１２ 泾阳油菜
３１４ 天油３号
１３ CALSSR ROX １３６~１６１
１３６ 芮城五角籽
１３９ 泾阳油菜
１４２ 白杂１９号
１４４ 皖油１号
１４６ 兴义白油菜
１６１ 斯班
１４ BnGMS１６５ TAMRA ３５３~３７０
３５３ 浩油５号
３５６ 浩油４号
３６１ 芮城五角籽
３６４ 云梦剑杆白
３７０ ９８５８
１５ BnGMS１７５ ROX ２２４~２３８
２２４ 北油１号
２２６ 北山油菜
２２８ 宁强苍社油菜
２３４ 延油３号
２３８ 兴义白油菜
１６ BnGMS１８１ HEX １８１~１８８
１８１ 皖油１号
１８５ 硖石向阳籽
１８８ 泾阳油菜
１７ CX４８ ROX ２１９~２４４
２１９ 芮城五角籽
２３４ 泾阳油菜
２４０ 宁强苍社油菜
２４４ 硖石向阳籽
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NY/T４４９６—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围(bp) 主要等位变异(bp) 参照品种
１８ CX８１ HEX １８８~２０９
１８８ 硖石向阳籽
２００ 泾阳油菜
２０３ 青油１７号
２０９ 云梦剑杆白
１９ CX１１１ ６ＧFAM ２００~２０６
２００ 天油３号
２０３ 硖石向阳籽
２０６ 泾阳油菜
２０ CX１１９ ROX １９９~２１１
１９９ 云梦剑杆白
２０５ 泾阳油菜
２１１ 芮城五角籽
２１ CX６３ ６ＧFAM １９２~２０１
１９２ 延油３号
１９５ 硖石向阳籽
２０１ 云梦剑杆白
２２ Ra１ＧH０８ HEX １７９~１９１
１７９ 泾阳油菜
１８５ 皖油１号
１９１ 芮城五角籽
２３ A７７０９６ ６ＧFAM ２０５~２２０
２０５ 硖石向阳籽
２１８ 天油３号
２２０ 泾阳油菜
２４ CB１０２９８ ROX １９９~２１８
１９９ 青油２４１
２０５ 云梦剑杆白
２１８ 芮城五角籽
２５ CB１０１０９ HEX ２５９~２８２
２５９ 泾阳油菜
２７２ 云梦剑杆白
２７８ 银黄
２８２ 青油１７号
２６ CB１０５２４ HEX ２１７~２３８
２１７ 硖石向阳籽
２２３ 白杂１９号
２３８ 泾阳油菜
２７ Na１２D０４ HEX ２６８~２８６
２６８ 斯班
２７２ 宁强苍社油菜
２７８ 青油２４１
２８０ 云梦剑杆白
２８２ 门源小油菜
２８６ 银黄
２８ Na１４D０７ ６ＧFAM １２３~１２９
１２３ 兴义白油菜
１２６ 芮城五角籽
１２９ 宁强苍社油菜
２９ Na１４G１０ TAMRA １２８~１７６
１２８ 天油３号
１５７ 云梦剑杆白
１６４ 泾阳油菜
１７６ 硖石向阳籽
３０ Ol１０F１２ ６ＧFAM １０９~１２９
１０９ 白杂１９号
１１２ 芮城五角籽
１２３ 泾阳油菜
１２９ 云梦剑杆白
注１:附录D中采用的荧光标记仅为示例,采用其他类型荧光标记时,需要用参照品种校正数据.
注２:对于附录D中未包括的等位变异,应按本文件方法,确定其大小和相应参照品种.
注３:附录D中所列参照品种仅为示例,与参照品种具有相同等位变异的其他品种也可用作该等位变异的参照品种.
注４:同一名称不同来源的参照品种,在某些位点上的等位变异可能不相同,使用前需确认其等位变异.
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NY/T４４９６—２０２５
附　录　E
(资料性)
参照品种相关信息

参照品种相关信息见表E?１.
表E?１　参照品种相关信息
编号品种名称品种来源编号品种名称品种来源
１ 浩油１１号青海大学２２ 花籽北方白青海大学
２ 天油１号青海大学２３ 天油４号青海大学
３ 紫株分混青海大学２４ 银黄青海大学
４ 青油９号青海大学２５ 白杂１９号青海大学
５ 北油１号青海大学２６ 天油３号青海大学
６ 北山油菜青海大学２７ 皖油１号青海大学
７ ９８５８ 青海大学２８ 兴义白油菜青海大学
８ 浩油４号青海大学２９ 宁强苍社油菜青海大学
９ 浩油５号青海大学３０ 延油３号青海大学
１０ 门源小油菜青海大学３１ 硖石向阳籽青海大学
１１ 斯班青海大学３２ 云梦剑杆白青海大学
１２ 青油１７号青海大学３３ 泾阳油菜青海大学
１３ 青油２４１ 青海大学３４ 芮城五角籽青海大学
１４ 浩油６号青海大学３５
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NY/T４４９６—２０２５
附　录　F
(资料性)
引物分组

引物分组见表F?１.
表F?１　引物分组
分组６ＧFAM 标记引物HEX标记引物ROX标记引物TAMRA标记引物
１ Ol１０F１２(１０９~１２９) ACMP００４２４(１３５~１５１) CB１０２９８(１９９~２１８) ACMP００７５９(１７９~１９３)
２ Na１４D０７(１２３~１２９) Ra１ＧH０８(１７９~１９１) CALSSR(１３６~１６１) ACMP００２５３(１９５~２０１)
３ ACMP００７４９(１７３~１７９) ACMP０００８５(１５６~１７０) CX１１９(１９９~２１１) ACMP０００６４(２３０~２６３)
４ SauＧum１４６(１５４~１７０) ACMP００７１６(１８７~２１１) BnGMS１７５(２２４~２３８) SauＧum４４５(２９３~３１４)
５ CX６３(１９２~２０１) BnGMS１８１(１８１~１８８) CX４８(２１９~２４４) Na１４G１０(１２８~１７６)
６ CX１１１(２００~２０６) CB１０５２４(２１７~２３８) ACMP００３７４(２７２~２９３) BnGMS１６５(３５３~３７０)
７ A７７０９６(２０５~２２０) CB１０１０９(２５９~２８２) ACMP００８３９(３４８~３９２)
８ ACMP００５２８(２８８~３００) CX８１(１８８~２０９)
Na１２D０４(２６８~２８６)
注１:括号内是各引物的等位变异范围.
注２:同组别内引物的扩增产物可以多重电泳.
注３:可结合引物等位变异范围,更换荧光标记,调整分组.
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