NY/T 4489-2025 甜瓜品种鉴定 SSR分子标记法

１　范围
本文件规定了利用简单重复序列(SSR)标记进行甜瓜(Cucumismelo L?)品种鉴定的术语和定义、缩略
语、原理、主要仪器设备及试剂、溶液配制、引物信息及使用、参照品种及使用、操作程序、结果判定与表述.
本文件适用于甜瓜品种的DNA 分子数据采集和品种鉴定.
２　规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅
该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.
GB/T３５４３?２农作物种子检验规程　扦样
GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法
NY/T２５９４植物品种鉴定DNA 分子标记法　总则
３　术语和定义
NY/T２５９４界定的术语和定义适用于本文件.
４　缩略语
下列缩略语适用于本文件.
APS:过硫酸铵(ammoniumpersulphate).
bp:碱基对(basepair).
CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammoniumbromide).
DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid).
dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyＧribonucleosidetriphosphates).
EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid).
PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis).
PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction).
SSR:简单重复序列(simplesequencerepeat).
Taq 酶:耐热DNA 聚合酶(TaqＧDNApolymerase).
TBE:三羟甲基氨基甲烷硼酸盐乙二胺四乙酸(TrisＧborateＧEDTA).
TE:三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸(TrisＧEDTA).
TEMED:四甲基乙二胺(N,N,N′,N′Ｇtetramethylethylenediamine).
Tris:三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)methylaminomethaneTHAM).
５　原理
甜瓜品种基因组中存在着大量能够稳定遗传的SSR 标记,不同甜瓜品种在同一SSR 的重复次数存
在差异,这种差异可通过PCR扩增及电泳方法进行检测,进而区分不同的品种.
６　主要仪器设备及试剂
主要仪器设备及试剂见附录A.
７　溶液配制
溶液配制方法见附录B.
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８　引物信息及使用
引物及序列见附录C,引物相关信息见附录D.利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测时选择普
通引物;利用荧光毛细管电泳检测时选择荧光标记引物,荧光标记位于正向引物５′端,推荐的荧光标记见
附录D.可利用附录C中的引物序贯检测,当检测到的差异位点数能判定送检样品与对照样品不同时,停
止检测.
９　参照品种及使用
参照品种用于辅助确定送检样品在某个位点的等位变异,宜与送检样品同时检测,参照品种相关信息
见附录E.
１０　操作程序
１０?１
样品准备
送检样品可为种子、幼苗、叶片等组织或器官.种子样品需扦样时,应符合GB/T３５４３?２的规定.每
份样品不少于３０个个体,等量混合分析,必要时进行个体检测.
１０?２
DNA 提取
取混合样本约２００mg,置于２?０mL圆底离心管中,经液氮冷冻后充分研磨;每管加入６００μL预热到
６５℃的CTAB提取液,充分混合;６５℃水浴４５min~６０min,每隔１５min轻缓颠倒混匀一次.每管加入
与CTAB提取液等体积的三氯甲烷和异戊醇混合液,轻缓混匀后静置１０min,１２０００rpm 离心１０min.
吸取上清液转移至新的离心管中,加入等体积预冷的异丙醇,轻轻颠倒混匀,－２０ ℃放置３０min,４ ℃、
１２０００rpm 离心１０min.弃上清液,用体积分数为７０％的乙醇溶液洗涤２遍,晾干,加入１００μL双蒸水
或TE缓冲液充分溶解,检测DNA 浓度和质量,－２０℃保存备用.
注１:以上为推荐的DNA提取方法,DNA质量能够满足PCR扩增要求的其他DNA提取方法均适用于本标准.DNA
溶液的紫外吸光度OD２６０与OD２８０的比值宜介于１?７~２?０之间.
注２:三氯甲烷和异戊醇混合液中三氯甲烷与异戊醇的体积比为２４∶１.
１０?３
PCR 扩增
１０?３?１　反应体系
PCR扩增反应体系的总体积和各组分的终浓度参照表１配制,可以依据试验条件调整.
表１　PCR 扩增反应体系
反应组分原浓度终浓度推荐体积μL
１０×缓冲液(含MgCl２) １０× １× ２?０
dNTPs ２?５mmol/L ０?２mmol/L １?６
Taq 酶５U/μL ０?０５U/μL ０?２
正向引物５μmol/L ０?２５mmol/L １?０
反向引物５μmol/L ０?２５mmol/L １?０
DNA ２５ng/μL ２?５ng/μL ２?０
双蒸水— — １２?２
总体积２０?０
１０?３?２　反应程序
推荐反应程序:９４℃预变性５min;９４℃变性３０s,５５℃退火３０s,７２℃延伸４５s,共３５个循环;７２℃
延伸１０min,产物４℃保存.
反应程序中各反应参数可根据PCR扩增仪型号、酶、引物等不同而做适当的调整.
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１０?４
PCR 产物电泳
１０?４?１　垂直板变性PAGE
１０?４?１?１　制胶
用洗涤剂将玻璃板清洗干净,再用双蒸水、无水乙醇依次擦洗２遍.玻璃板干燥后,将０?５mL亲和
硅烷工作液均匀涂在长玻璃板上,将０?５mL剥离硅烷工作液均匀涂在带凹槽的短玻璃板上.操作过程
中应防止两块玻璃板互相污染.玻璃板彻底干燥后,将０?４mm 厚的塑料隔条整齐放在长玻璃板两侧,盖
上凹槽短玻璃板,用夹子固定,用水平仪调平.取１００mL质量分数为６％的PAGE胶溶液,加入５０μL
四甲基乙二胺(TEMED)和５００μL质量分数为１０％的过硫酸铵(APS),迅速混匀,将胶灌入玻璃胶室,灌
胶过程中应防止出现气泡.待胶室灌满后,在凹槽处将０?４mm 厚鲨鱼齿梳子平齐端向里轻轻插入胶液
约４mm,室温聚合１h以上,胶聚合后,清理胶板表面溢出的胶液,轻轻拔出梳子,用水洗净备用.
１０?４?１?２　变性
在２０μLPCR产物中加入４μL６× 加样缓冲液,混匀.在PCR扩增仪上运行９５℃变性５min,４℃
冷却１０min以上备用.
１０?４?１?３　电泳
将胶板安装于电泳槽上,在电泳正极槽和负极槽(上槽)各加入６００mL的１× TBE缓冲液,使其没过
电极线.１８００V 恒压预电泳１０min~２０min.用移液器吹吸加样槽,清除气泡和杂质.将样品梳(鲨鱼
齿朝下)插入凝胶１mm~２mm.每一个加样孔点入３μL~５μL样品.除送检样品外,还宜同时加入参
照品种扩增产物和合适的DNA 分子量标准..１８００V 恒压电泳,电泳时间参考二甲苯青指示带泳动的位
置和扩增产物预期片段大小范围(见附录D)加以确定.二甲苯青指示带在质量分数为６％PAGE胶电泳
的泳动位置与２３０bp扩增产物泳动的位置大致相当.扩增产物片段大小在(１００±３０)bp、(１５０±３０)bp、
(２００±３０)bp、(２５０±３０)bp范围的,电泳参考时间分别为１?５h、２?０h、２?５h、３?５h,当等位变异碱基对数
差异较小时,可适当延长电泳时间.电泳结束后关闭电源,取下玻璃板并轻轻撬开,凝胶附着在长玻璃板上.
１０?４?１?４　染色
将附着凝胶的长玻璃板胶面向上浸入固定液中,轻轻晃动３min后取出,在双蒸水中快速漂洗,时间
不超过１０s;将胶板放入染色液中,轻轻晃动５min~１０min后取出,在双蒸水中快速漂洗,时间不超过１０
s;将胶板放入显影液中,轻摇晃动待条带清晰后取出,再迅速放入固定液中定影５min取出,在双蒸水中
漂洗１min;取出胶板,晾干,放在胶片观察灯上观察,记录结果,拍照保存.
注:固定液、染色液、双蒸水和显影液的用量,以淹没胶面为准.
１０?４?２　荧光毛细管电泳
１０?４?２?１　PCR产物样品准备
根据预先确定的引物分组(见附录F),分别取等体积不同荧光标记引物的扩增产物,混匀稀释.吸取
１μL混合液,加入到DNA 分析仪配套上样板中.
注:稀释倍数通过荧光毛细管电泳预实验确定.
１０?４?２?２　变性
上样板各孔分别加入０?１μL 分子量内标和８?９μL 去离子甲酰胺,在PCR 扩增仪上９５ ℃变性５
min,取出后立即置于冰上,冷却１０min以上,瞬时离心１０s后备用.
１０?４?２?３　电泳
按照DNA 分析仪操作手册电泳,并保存电泳原始数据文件.
１０?５
数据分析
１０?５?１　等位变异确定与记录
每个SSR位点的等位变异参照扩增片段大小确定,见附录D.对于变性PAGE,将送检样品在某一
位点扩增片段的迁移位置与对应的参照品种进行比较,确定送检样品在该位点的等位变异.对于荧光毛
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细管电泳,通过参照品种消除不同批次或者不同型号DNA 分析仪可能存在的系统误差,使用片段分析软
件读取送检样品在该位点的等位变异.
纯合位点的等位变异数据记录为X/X,杂合位点的等位变异数据记录为X/Y,其中X、Y 分别为该位
点上的两个等位变异,小片段数据在前,大片段数据在后.缺失位点的等位变异数据记录为０/０.
示例１:样品在某个位点上仅出现一个等位变异,为１６０bp,则该位点的等位变异数据记录为１６０/１６０.
示例２:样品在某个位点上有两个等位变异,分别为１６０bp、１６５bp,则该位点的等位变异数据记录为１６０/１６５.
１０?５?２　数据比对与差异位点统计
逐一比对送检样品与对照样品每个位点的等位变异数据,按照位点相同、位点差异、数据缺失、无法判
定情形,记录每个位点的比对结果,统计检测位点数和差异位点数.
１１　结果判定与表述
１１?１
判定规则
当差异位点数大于２,判定为“不同”;当差异位点数小于等于２,判定为“疑同”.
１１?２
结果表述
送检样品与对照样品(或对照样品指纹)采用检测,检
测位点数为,差异位点数为,判定为.
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附　录　A
(规范性)
主要仪器设备及试剂

A?１　主要仪器设备
A?１?１　PCR扩增仪.
A?１?２　高压电泳仪:最高电压不低于２０００V,具有恒电压、恒电流和恒功率功能.
A?１?３　垂直电泳槽及配套的制胶附件.
A?１?４　离心机.
A?１?５　水平摇床.
A?１?６　胶片观察灯.
A?１?７　电子天平:感量为０?１g和０?０１g.
A?１?８　微量移液器:规格分别为１０μL、２０μL、１００μL、２００μL、１０００μL,连续可调.
A?１?９　磁力搅拌器.
A?１?１０　核酸浓度测定仪或超微量紫外分光光度计.
A?１?１１　微波炉.
A?１?１２　高压灭菌锅.
A?１?１３　酸度计.
A?１?１４　水浴锅.
A?１?１５　低温冰箱.
A?１?１６　制冰机.
A?１?１７　凝胶成像系统或紫外透射仪.
A?１?１８　DNA 分析仪:基于毛细管电泳,有片段分析功能和数据分析软件,最低区分力１bp.
A?１?１９　其他相关仪器和设备.
A?２　主要试剂
除非另有说明,均使用分析纯试剂.
A?２?１　十六烷基三甲基溴化铵[CTAB,C１６H３３(CH３)３NBr,CAS号:５７Ｇ０９Ｇ０].
A?２?２　三氯甲烷(CHCl３,CAS号:６７Ｇ６６Ｇ３).
A?２?３　异戊醇(C５H１２O,CAS号:１２３Ｇ５１Ｇ３).
A?２?４　异丙醇[(CH３)２CHOH,CAS号:６７Ｇ６３Ｇ０].
A?２?５　乙二胺四乙酸二钠(EDTAＧNa,C１０H１４N２Na２O８,CAS号:１３９Ｇ３３Ｇ３).
A?２?６　三羟甲基氨基甲烷(Tris,C４H１１NO３,CAS号:７７Ｇ８６Ｇ１).
A?２?７　浓盐酸(HCl,CAS号:７６４７Ｇ０１Ｇ０).
A?２?８　氢氧化钠(NaOH,CAS号:１３１０Ｇ７３Ｇ２).
A?２?９　１０×PCR缓冲液:含Mg２＋２５mmol/L.
A?２?１０　４种脱氧核糖核苷酸:dATP、dTTP、dGTP、dCTP.
A?２?１１　SSR引物.
A?２?１２　氯化钠(NaCl,CAS号:７６４７Ｇ１４Ｇ５).
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A?２?１３　Taq DNA 聚合酶(Taq 酶,CAS号:９０１２Ｇ９０Ｇ２).
A?２?１４　DNA Marker:DNA 片段分布范围在５０bp~５００bp.
A?２?１５　甲酰胺(CH３NO,CAS号:７５Ｇ１２Ｇ７).
A?２?１６　溴酚蓝(C１９H１０Br４O５S,CAS号:１１５Ｇ３９Ｇ９).
A?２?１７　二甲苯青(C２５H２７N２NaO６S２,CAS号:２６５０Ｇ１７Ｇ１).
A?２?１８　甲叉双丙烯酰胺[(H２C＝CHCONH)２CH２,CAS号:１１０Ｇ２６Ｇ９].
A?２?１９　丙烯酰胺(C３H５NO,CAS号:７９Ｇ０６Ｇ１).
A?２?２０　硼酸(H３BO３,CAS号:１００４３Ｇ３５Ｇ３).
A?２?２１　尿素(CH４N２O,CAS号:５７Ｇ１３Ｇ６).
A?２?２２　亲和硅烷.
A?２?２３　二甲基二氯硅烷(C２H６Cl２Si,CAS号:７５Ｇ７８Ｇ５).
A?２?２４　无水乙醇(C２H６O,CAS号:６４Ｇ１７Ｇ５).
A?２?２５　四甲基乙二胺(TEMED,C６H１６N２,CAS号:１１０Ｇ１８Ｇ９).
A?２?２６　过硫酸铵[APS,(NH４)２S２O８,CAS号:７７２７Ｇ５４Ｇ０].
A?２?２７　冰醋酸(CH３COOH,CAS号:６４Ｇ１９Ｇ７).
A?２?２８　硝酸银(AgNO３,CAS号:７７６１Ｇ８８Ｇ８).
A?２?２９　甲醛(HCHO,CAS号:５０Ｇ００Ｇ０).
A?２?３０　DNA 分析仪用丙烯酰胺胶液.
A?２?３１　DNA 分析仪用分子量内标.
A?２?３２　DNA 分析仪用电泳缓冲液.
A?２?３３　DNA 分析仪用光谱校准基质.
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附　录　B
(规范性)
溶液配制

试剂配制用水应符合标准GB/T６６８２的要求.
B?１　DNA 提取溶液的配制
B?１?１　０?５mol/LEDTA 溶液
称取１８６?１gNa２EDTA?２H２O 溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加NaOH 调pH 至８?０,加水定容
至１０００mL,１２１℃高压灭菌２０min.
B?１?２　０?５mol/LHCl溶液
量取２５mL浓盐酸(质量分数为３６％ ~３８％),加水定容至５００mL.
B?１?３　１mol/LNaOH 溶液
称取４０?０gNaOH 溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加水定容至１０００mL.
B?１?４　１mol/LTrisＧHCl溶液
称取１２１?１gTris碱溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加HCl调pH 至８?０,加水定容至１０００mL,
１２１℃高压灭菌２０min.
B?１?５　CTAB提取液
称取２０?０gCTAB、８１?７gNaCl置于１０００mL烧杯中,量取１００mL１mol/LTrisＧHCl溶液和４０mL
０?５mol/LEDTA 溶液倒入烧杯中,加７００mL水,充分搅拌溶解,加水定容至１０００mL,１２１℃高压灭菌
２０min.
B?１?６　TE缓冲液
量取５mL１mol/LTrisＧHCl溶液和１mL０?５mol/LEDTA 溶液,加水定容至５００mL,１２１℃高压
灭菌２０min,４℃保存.
B?２　PCR 扩增试剂的配制
B?２?１　dNTPs溶液
分别配制dATP、dTTP、dCTP、dGTP终浓度为１００mmol/L的储存液.各取２０μL混合,加７２０μL
TE缓冲液定容,配制成每种脱氧核糖核苷酸终浓度为２?５mmol/L的工作液,１２１ ℃高压灭菌２０min,
－２０ ℃保存.
B?２?２　SSR 引物溶液
开盖前瞬时离心１０s,按照说明书加TE缓冲液,分别配制正向引物和反向引物终浓度为１００μmol/
L的储存液.分别取１０μL正向引物和反向引物储存液,加１８０μLTE缓冲液配制成终浓度５μmol/L的
工作液.
B?３　变性PAGE试剂的配制
B?３?１　质量分数为４０％的丙烯酰胺溶液
称取１９０?０g丙烯酰胺和１０?０g甲叉双丙烯酰胺溶于４００mL水中,充分搅拌溶解,加水定容至５００
mL,置于棕色瓶中,４℃储存.
B?３?２　质量分数为６％的变性PAGE胶溶液
称取４２０?０g尿素置于１０００mL烧杯中,加入１００mL１０×TBE缓冲液和１５０mL质量分数为４０％
的丙烯酰胺溶液,定容至１０００mL.
B?３?３　亲和硅烷缓冲液
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分别量取９９?５mL无水乙醇和５００μL冰醋酸,加水定容至１００mL.
B?３?４　亲和硅烷工作液
分别量取１mL亲和硅烷缓冲液和５μL亲和硅烷原液,混匀.
B?３?５　剥离硅烷工作液
分别量取２５mL二甲基二氯硅烷和７５mL三氯甲烷,混匀.
B?３?６　质量分数为１０％的APS溶液
称取１?０gAPS溶于１０mL水中,混匀,于４℃保存(不超过５天).
B?３?７　１０×TBE 缓冲液
称取Tris１０８?０g,硼酸５５?０g,溶于８００mL水中,加入３７mLEDTA 溶液(０?５mol/L,pH８?０),定
容至１０００mL.
B?３?８　１×TBE缓冲液
量取５０mL１０× TBE缓冲液,加水定容至５００mL,混匀.
B?３?９　６× 加样缓冲液
分别称取０?２５g溴酚蓝和０?２５g二甲苯青,加入９８mL 去离子甲酰胺和２mLEDTA 溶液(０?５
mol/L,pH８?０),搅拌溶解.
B?４　银染溶液的配制
B?４?１　固定液
量取１００mL冰醋酸,加水定容至１０００mL.
B?４?２　染色液
称取１?０g硝酸银,加水定容至１０００mL.
B?４?３　显影液
称取２０?０g氢氧化钠溶于１０００mL水中,用前加２mL甲醛.
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附　录　C
(规范性)
引物及序列

引物及序列见表C?１.
表C?１　引物及序列
引物编号引物名称染色体定位正向引物序列(５′→３′) 反向引物序列(５′→３′)
１ ME１ １ TGGAATACCATCTTACACCTTTCA TCCATAAACATTTCCCCGTT
２ ME２ １ GGCCACGTGACCTTATGATT CCTTCATCATTTCCAAGGGA
３ ME３ ２ TTGGCTCCTCTTAGTGTCCTC ATGTCAATGCCTTGTGAAGC
４ ME４ ２ ATGGGCTTTTGGTGATTGAT TTCTTCCCACCAAACCTACG
５ ME５ ３ ACACACCTAATCTCCCTACCTTC AAAGCCAACCCATATCCCAT
６ ME６ ３ CCCTCAATTACAAGAAAAGCA TTACTGGGTTTTGCCGATTT
７ ME７ ４ GCGCAAATCAAGGGATTTTA ATCCAAGGGAAAATGGGAAC
８ ME８ ４ GGAGGACGAAAGACCAATGA AACCGCAAATACGAGACCTG
９ ME９ ５ GACAGTAATCACCTCATCAAC GCTCCTCCTTAACTCTATAC
１０ ME１０ ５ CCCCAAGATTCGTATTAATC AGATTCTTGAAATGGTGGCG
１１ ME１１ ６ GCCTTTTGTGATGCTCCAAT AATGACACTGCCCACATTCT
１２ ME１２ ６ CCACCAACATAACACACAAC AGAGTCTCATTCCTCTCGACG
１３ ME１３ ７ GGTCGGTCCCCTATTCTCTT GTGCAAATGCAAGATCGAAG
１４ ME１４ ７ CATCTCGAACCTAAGAGCCG GCCCTCCCAAAAATTTCAGT
１５ ME１５ ８ ATGGTCTCCCCAACCTATCC GAACAATGCAAGAAAATGGGA
１６ ME１６ ８ GCGTTTCCAAACAAACATGA AAATGGCAGAGAGCGAGAAA
１７ ME１７ ９ CTCAAACAACGTCAGCTGGT ACCCAGAAGTGCTTTTCCCT
１８ ME１８ ９ TGAACTGTGCAACCACCTGT AATTCCGTATTCAACTCTCC
１９ ME１９ １０ ATGATTGGAAGCCACCAAAG TTGAGCCCCAAAATAAATGG
２０ ME２０ １０ CGACCGCCATTAATCAAAAC TCTCCTGCATAAACCCCAAG
２１ ME２１ １１ GGGAATGTAAATTGGATATG GCATTATTACCCATGTACGAG
２２ ME２２ １１ TGGTAGTAGAGATGATATAC TCAATCTCCGGTTCCAACTC
２３ ME２３ １２ AAACAAACATGGAAATAGCTTTCA AGGTTTTTCAATGGAGGGGA
２４ ME２４ １２ CTCTCACACTGTTGGGAAGA TGTGTATGGAGGGCTTTTCC
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附　录　D
(资料性)
引物相关信息

引物相关信息见表D?１.
表D?１　引物相关信息
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围(bp) 主要等位变异(bp) 参照品种
１ ME１ ６ＧFAM ２６３~２９２
２６３ 卡拉其里甘
２８６ 八一香梨
２９２ PMRＧ４５
２ ME２ HEX １９８~２１７
１９８ 白皮脆
２００ 安农３号
２０２ 哈莫尼
２０６ 白兰瓜
２１５ 伯些克辛
２１７ 光皮胜金白瓜
３ ME３ ６ＧFAM ２２７~２６１
２２７ 青皮白肉冬瓜
２４７ ９６０１
２６１ ９６５３
４ ME４ ６ＧFAM ２５２~２７５
２５２ 铁皮
２５５ 劈山
２６１ 卡拉可口奇
２６９ 金棒子
２７５ 鲁薄二号
５ ME５ HEX ２２６~２６６
２２６ 景甜１号
２５８ 黑眉毛密极甘
２６１ 哈莫尼
２６６ 酥皮菜瓜
６ ME６ TAMRA ２００~２１６ ２００ 卡拉可口奇
２１６ ９６０２
７ ME７ ROX ２１４~２２８
２１４ 白兰瓜
２２４ 阿克可口奇
２２８ 伯些克辛
８ ME８ TAMRA ２１６~２３８
２１６ ９６０１
２３０ 光皮胜金白瓜
２３２ 阿克可口奇
２３６ 伯些克辛
２３８ 白兰瓜
９ ME９ HEX １３２~１５０
１３２ 酥皮菜瓜
１３６ 安农３号
１３８ 哈莫尼
１４１ 阿克可口奇
１４５ 白兰瓜
１５０ 金棒子
１０ ME１０ HEX １９６~２１１
１９６ 安农３号
１９９ 哈莫尼
２０８ 伯些克辛
２１１ 白皮脆
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表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围(bp) 主要等位变异(bp) 参照品种
１１ ME１１ ROX １７２~２３８
１７２ 青皮白肉冬瓜
１７８ 白皮脆
１８１ 安农３号
２２３ ９６５３
２２６ PMRＧ４５
２２９ ９６０１
２３８ 酥皮菜瓜
１２ ME１２ ６ＧFAM １１１~１２９
１１１ 安农３号
１１９ 酥皮菜瓜
１２３ 哈莫尼
１２５ 卡拉其里甘
１２９ 八一香梨
１３ ME１３ TAMAR １９０~２００
１９０ 哈莫尼
１９２ 鲁薄二号
２００ 含笑
１４ ME１４ ROX １５５~１６５
１５５ 景甜１号
１５９ 白兰瓜
１６５ 卡拉可口奇
１５ ME１５ HEX １１５~１４４
１１５ 鲁薄二号
１１８ ９６０２
１２０ 阿克可口奇
１２３ 八一香梨
１３８ 卡拉可口奇
１４４ 白皮脆
１６ ME１６ TAMRA １７７~１９２
１７７ 黑眉毛密极甘
１８０ 白皮脆
１８９ 哈莫尼
１９２ 光皮胜金白瓜
１７ ME１７ TAMRA １７７~２１６
１７７ 景甜１号
１８９ 黑眉毛密极甘
２１４ 铁皮
２１６ 金棒子
１８ ME１８ ROX １０３~１４８
１０３ 卡拉其里甘
１１９ 哈莫尼
１４５ 光皮胜金白瓜
１４８ 白兰瓜
１９ ME１９ ６ＧFAM １２２~１３０
１２２ 青皮白肉冬瓜
１２４ 八一香梨
１２６ 白皮脆
１３０ 鲁薄二号
２０ ME２０ HEX ２４３~２７４
２４３ 伯些克辛
２５３ 光皮胜金白瓜
２５６ 八一香梨
２６５ PMRＧ４５
２６８ 酥皮菜瓜
２７４ ９６０２
２１ ME２１ ６ＧFAM １０９~１３８
１０９ 金棒子
１１１ ９６５３
１３０ 光皮胜金白瓜
１３２ 白兰瓜
１３８ 阿克可口奇
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NY/T４４８９—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围(bp) 主要等位变异(bp) 参照品种
２２ ME２２ ６ＧFAM １０７~１２６
１０７ 卡拉可口奇
１２４ 白兰瓜
１２６ 哈莫尼
２３ ME２３ ６ＧFAM １１９~１３５
１１９ 哈莫尼
１２３ 安农３号
１３１ 鲁薄二号
１３３ 含笑
１３５ 黑眉毛密极甘
２４ ME２４ ROX ２３５~２４６
２３５ 青皮白肉冬瓜
２４３ 阿克可口奇
２４５ 景甜１号
２４６ ９６５３
注１:附录D中采用的荧光标记仅为示例,采用其他类型荧光标记时,应使用参照品种校正数据.
注２:对于附录D中未包括的等位变异,应按本文件方法,确定其大小和相应参照品种.
注３:附录D中所列参照品种仅为示例,与参照品种具有相同等位变异的其他品种也可用作该等位变异的参照品种.
注４:同一名称不同来源的参照品种,在某些位点上的等位变异可能不相同,使用前应确认其等位变异.
１２
NY/T４４８９—２０２５
附　录　E
(资料性)
参照品种相关信息

参照品种相关信息见表E?１.
表E?１　参照品种相关信息
编号品种名称品种来源编号品种名称品种来源
１ 卡拉其里甘
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １３ 黑眉毛密极甘
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
２ 白皮脆
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １４ 含笑
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
３ 八一香梨
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １５ 安农３号
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
４ 光皮胜金白瓜
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １６ 哈莫尼
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
５ 伯些克辛
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １７ PMRＧ４５ 国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
６ 白兰瓜
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １８ 酥皮菜瓜
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
７ 金棒子
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) １９ ９６０１ 国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
８ 阿克可口奇
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) ２０ ９６０２ 国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
９ 铁皮
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) ２１ ９６５３ 国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
１０ 卡拉可口奇
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) ２２ 鲁薄二号
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
１１ 劈山
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐) ２３ 景甜１号
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
１２ 青皮白肉冬瓜
国家中亚特色作物种质
资源中期库(乌鲁木齐)
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NY/T４４８９—２０２５
附　录　F
(资料性)
引物分组

引物分组见表F?１.
表F?１　引物分组
组别FAM 标记引物TAMRA标记引物ROX标记引物HEX标记引物
１ ME３(２２７~２６１)
ME２３(１１９~１３５) ME１７(１７７~２１６) ME２４(２３５~２４６) ME２(１９８~２１７)
２ ME４(２５２~２７５)
ME２１(１０９~１３８) ME８(２９７~３００) ME１４(２１１~２１４) ME１０(１０７~１１８)
３ ME１９(１２２~１３０) ME６(２００~２１６) ME１８(１０３~１４８) ME２０(２４３~２７４)
４ ME１２(２２８~２５０) ME１３(２５９~２６２) ME１１(２７３~２７６) ME１５(１１５~１４４)
５ ME１(２６３~２９２)
ME２２(１０７~１２６) ME１６(１７７~１９２) ME７(２１４~２２８) ME５(２２６~２６６)
ME９(２２９~２３３)
注１:括号内是各引物的等位变异范围.
注２:同组别内引物的扩增产物可以多重电泳.
注３:可结合引物等位变异范围,更换荧光标记,调整分组.